貨號：WT-E5291【犬主要組織相容性復(fù)合體(MHC/DLA)ELISA試劑盒酶免法】ELISA的操作要點

優(yōu)質(zhì)的試劑，  良好的儀器和正確的操作是保證 ELISA檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。 ELISA的操作因固相載體的形成不同而有所差異， 國內(nèi)醫(yī)學(xué)檢驗一般均用板式點。 本文將敘述板式 ELISA各個操作步驟的注意要點，珠式、管式及磁性球ELSIA，國外試劑均與特殊儀器配合應(yīng)用，兩者均有詳細(xì)的使用說明，嚴(yán)格遵照規(guī)定操作， 必能得出準(zhǔn)確的結(jié)果。

【犬主要組織相容性復(fù)合體(MHC/DLA)ELISA試劑盒酶免法】4. 1標(biāo)本的采取和保存

可用作ELISA測定的標(biāo)本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標(biāo)本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測定（如血清、尿液），有些則需經(jīng)預(yù)處理（如糞便和某些分泌物）。大部分 ELISA檢測均以血清為標(biāo)本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外， 其他成份均同等于血清。 制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑， 而血清標(biāo)本只要待血清自然凝固、 xue塊收縮后即可取得。除特殊情況外，在醫(yī)學(xué)檢驗中均以血清作為檢測標(biāo)本。在ELISA中血漿和血清可同等應(yīng)用。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)注意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以 HRP為標(biāo)記的 ELISA測定中， 溶血標(biāo)本可能會增加非特異性顯色。

血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。如在冰箱中保存過久，其中的可發(fā)生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。一般說來，在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃，超過一周測定的需低溫冰存。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下顛倒混和，不要在混勻器上強烈振蕩?；鞚峄蛴谐恋淼难鍢?biāo)本應(yīng)先離心或過濾，澄清后再檢測。反復(fù)凍融會使抗體效價跌落，所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存。保存血清自采集時就應(yīng)注意無菌操作，也可加入適當(dāng)防腐劑（見3.2.4）。

【犬主要組織相容性復(fù)合體(MHC/DLA)ELISA試劑盒酶免法】4.2試劑的準(zhǔn)備

按試劑盒說明書的要求準(zhǔn)備實驗中需用的試劑。 ELISA中用的蒸餾水或去離子水， 包括用于洗滌的，

應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。 自配的緩沖液應(yīng)用 pH計測量較正。從冰箱中取出的試驗用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。 試劑盒中本次試驗不需用的部分應(yīng)及時放回冰箱保存。

【犬主要組織相容性復(fù)合體(MHC/DLA)ELISA試劑盒酶免法】4.3加樣

在ELISA中一般有3次加樣步聚，即加標(biāo)本，加酶結(jié)合物，加底物。加樣時應(yīng)將所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。

加標(biāo)本一般用微量加樣器，按規(guī)定的量加入板孔中。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴，以免發(fā)生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定（如間接法ELISA）需用稀釋的血清，可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液，再在其中加入血清標(biāo)本，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。 加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物應(yīng)用液時可用定量多道加液器， 使加液過程迅速完成。

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【犬主要組織相容性復(fù)合體(MHC/DLA)ELISA試劑盒酶免法】