人上皮中性粒細胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA 試劑盒

包裝規(guī)格：48T/96T

檢測方法：酶聯(lián)免疫

檢測標本：血清、血漿、細胞培養(yǎng)液等

本試劑盒僅供科研使用!

　合成/代謝elisa試劑盒在實驗前：
　　
　　在使用前，將所有試劑和樣品室溫。再次離心樣品解凍后測定前。據(jù)建議，所有樣品和標準來測定一式兩份。
　　
　　1。準備好所有試劑，工作標準和樣品在前面的章節(jié)中。
　　
　　2。請確定井數(shù)的使用，并把任何剩余的井和入袋干燥劑，密封保鮮袋，將未使用的井在4°C的含量布局表
　　
　　。每孔加入100μl的標準和樣品。封面用膠粘帶提供。孵育2小時，在37℃下一盤布局記錄標準和樣品檢測。
　　
　　4。每孔中取出的液體，不洗。
　　
　　5。向每孔中加入100μl*抗體（1倍）。蓋上一個新的膠粘帶。孵育1小時，在37℃下（*抗體（1X）可能會出現(xiàn)混濁。預熱至室溫，輕輕混勻，直到出現(xiàn)均勻解決方案。）
　　
　　6。吸液的各孔和洗滌，共洗滌三次重復該過程兩次。洗凈，每孔填充洗滌緩沖液（200μL）使用噴瓶，多道移液器，歧管器，或autowasher，和，靜置2分鐘，*清除液體的每一步是*的良好的性能。zui后一次洗滌后，清除任何剩余洗滌緩沖液的吸ordecanting。倒置板和涂抹對干凈的紙巾。
　　
　　7。向每孔中加入100μl的HRP-抗*蛋白（1×）。量的微量滴定板，用一個新的粘接劑條。溫育1小時，在37℃下
　　
　　8。重復的愿望/洗滌過??程中，在步驟6的5倍。
　　
　　9。將90μlTMB底物添加到每個孔中。孵育15-30分鐘，在37℃下避光
　　
　　10。一站式解決方案，每孔加入底物，輕輕晃動酶標板，以確保充分混合。
　　
　　11。在5分鐘內(nèi)，設置至450nm，使用酶標儀測定各孔的光密度。如果波長校正，設置為540nm或570nm處。在540nm或570nm波長在450nm處的讀數(shù)減去讀數(shù)。該減法校正板的光學缺陷。在450nm處未經(jīng)修正讀數(shù)直接，可能會比較高，不太準確。

人上皮中性粒細胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA 試劑盒 實驗原理

酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)原理

1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)用于IgG定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標抗體技術(shù)發(fā)展成液體標本中微量物質(zhì)的測定方法。

ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。

由于酶的催化頻率很高，故可*地地放大反應效果，從而使測定方法達到很高的敏感度

類型及步驟

ELISA的主要常用類型及步驟

1. 間接法測抗體

間接法是檢測抗體常用的方法。其原理為利用酶標記的抗抗體(二抗)以檢測與固相抗原結(jié)合的受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟如下：

1)將特異性抗原與固相載體聯(lián)結(jié)，形成固相抗原，洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。

2)加稀釋的樣本，保溫反應。樣本中的特異抗體與固相抗原結(jié)合，形成固相抗原抗體復合物。經(jīng)洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體，樣本中的其他成份在洗滌過程中被洗去。

3)加酶標抗抗體。固相免疫復合物中的抗體與酶標抗抗體結(jié)合，從而間接地標記上酶。洗滌后，固相載體上的酶量與樣本中受檢抗體的量正相關(guān)。

4)加底物顯色。

2. 雙抗體夾心法測抗原

雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的方法，操作步驟如下：

1)將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié)，形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。

2)加受檢樣本，保溫反應。樣本中的抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。

3)加酶標抗體，保溫反應。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與樣本中受檢抗原的量相關(guān)。

4)加底物顯色。

3. 雙抗原夾心法測抗體

反應原理和模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和制備酶結(jié)合物，以檢測相應的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體

4.競爭法測抗原

小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個以上的位點，因此不能用雙抗體夾心法進行測定，可以采用競爭法模式。其原理是標本中的抗原和一定量的酶標抗原競爭與固相抗體結(jié)合。標本中抗原量含量愈多，結(jié)合在固相上的酶標抗原愈少，zui后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。

ELISA Q&A

人上皮中性粒細胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA 試劑盒   如何選擇合適的陽性對照?

陽性對照的基本組成應該盡量與檢測樣本的組成*，一般陽性對照多以含蛋白保護劑的緩沖液為基質(zhì)，加入一定量的待檢物質(zhì)。比如，以人血清為標本的測定，陽性對照多用確定的病人血清或者以復鈣人血漿為原料加入一定量標準品。

如何選擇合適的陰性對照?

陰性對照的基本組成也應該盡量與檢測樣本的組成*，先行檢測確定其中不含待檢物質(zhì)。比如，檢測人血清標本時，陰性對照應該選擇正常人血清;檢測免疫動物血清中抗體效價時，陰性對照應該選擇該動物的免疫前血清。

如何選擇*化的包被條件?

1.包被抗原的選擇

包被抗原可分為天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類。天然蛋白需經(jīng)純化才能用直接吸附法包被，對于含雜質(zhì)較多的抗原可以采用間接捕獲法包被(先用能夠與目的抗原反應的物質(zhì)如抗體直接吸附在酶標板上，再通過特異性反應使抗原固相化)。經(jīng)純化的重組蛋白一般皆可直接包板。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有機化合物，由于分子量太小，往往難于直接吸附在酶標板上，一般都先使其與無關(guān)蛋白質(zhì)如BSA等偶聯(lián)，偶聯(lián)物吸附于固相載體上。

2.包被液的選擇

一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液，如果包被的抗原在堿性條件下不穩(wěn)定的話，也可以使用pH7.2的磷酸鹽緩沖液。

3.包被溫度的選擇

通常是4-8度條件下過夜或者37度保溫2小時，我們強烈建議4-8度條件下包被，有利于蛋白活性的保持。

4.包被濃度的選擇

包被的zui適濃度隨固相載體和包被物的性質(zhì)變化，一般蛋白質(zhì)的包被濃度為1-5ug/ml，要明確針對特定包被抗原的zui適包被濃度需要通過實驗來確定。

包板后需要封閉嗎?應該選擇什么樣的封閉體系?

封閉是否必要，取決于ELISA的模式及具體的實驗條件。一般說來，雙抗體夾心法，只要酶標記物是高活性的，操作時洗滌*，不經(jīng)封閉也可得到滿意的結(jié)果。而在間接法測定中，封閉一般是*的。

常用的封閉劑有0.05%-0.5%的BSA、10%的小牛血清、1%明膠、5%的脫脂奶粉，AbMART*使用5%脫脂奶粉，價廉而且封閉能力強，不過5%脫脂奶粉只適合短期內(nèi)使用，不宜*保存，所以試劑盒中較少使用。

人上皮中性粒細胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA 試劑盒 如何正確使用酶結(jié)合物?

1.酶結(jié)合物的稀釋液

在稀釋液中常加入高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)(例如1%BSA或5%脫脂奶粉)，通過競爭抑制酶結(jié)合物在固相載體上的非特異性吸附。一般還加入能夠抑制蛋白質(zhì)吸附于塑料表面的非離子型表面活性劑，如吐溫20(0.05%的濃度較為適宜)。

2.正確稀釋酶結(jié)合物

酶結(jié)合物的合適工作濃度需要通過預實驗來確定，濃度過高易導致本底偏高，濃度過低則會導致陽性信號的減弱。

酶結(jié)合物在使用前稀釋，稀釋后的酶結(jié)合物不宜*保存，因為低濃度的酶結(jié)合物極易失活。

人上皮中性粒細胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA 試劑盒  其他產(chǎn)品：

  與人凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒相關(guān)的ELISA試劑盒產(chǎn)品還有：張女士 蘇州系統(tǒng)醫(yī)學研究所合作單位

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　　人轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA測定試劑盒，name：transforming growth factors β2，TGFβ2 ELISA Kit，規(guī)格：96T/48T   張 內(nèi)蒙古醫(yī)科大學

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　　人生長激素釋放因子(GH-RF)ELISA測定試劑盒，name：growth hormone relasing factor，GH-RF ELISA Kit，規(guī)格：96T/48T   山西臨猗李大夫皮膚病?？漆t(yī)院

　　人巨噬細胞趨化因子(MCF)ELISA測定試劑盒，name：macrophage chemotatic factor，MCF ELISA Kit，規(guī)格：96T/48T   張女士  湖南生物機電職院

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　　人B細胞生長因子(BCGF)ELISA測定試劑盒，name：B cell growth protein，BCGF ELISA Kit，規(guī)格：96T/48T  何老師 天津254醫(yī)院

　　人可溶性粘附分子(Sam)ELISA測定試劑盒，name：soluble adhesion molecules，Sam ELISA Kit，規(guī)格：96T/48T   方  西安德祥商貿(mào)有限公司

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    兔CD30分子(CD30)Elisa試劑盒 ，英文名： Clusterofdifferentiation30，CD30ELISAKit ，規(guī)格： 96T/48T   李 深圳森科技有限公司