注意事項：
1. 本試劑盒的檢測試劑中含有螢光素酶，反復凍融會導致其逐漸失活。盡管經(jīng)測試本試劑反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，為取得良好的使用效果，*次解凍后可適當分裝保存。反復凍融過程中，可能會導致檢測試劑中出現(xiàn)少量沉淀，此時宜平衡至室溫，并盡量溶解。如仍有殘留的不溶物，可以離心去除后使用，經(jīng)測試不會影響后續(xù)的檢測效果。
2. 檢測時需使用白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板，相鄰孔之間會產(chǎn)生相互干擾。
3. Annexin V-PE/7-AAD細胞凋亡流式檢測試劑盒使用說明中提供了檢測ATP標準品的方法，實際檢測細胞活力時通常并不需要檢測ATP標準品。
細胞凋亡早期改變發(fā)生在細胞膜表面，這些細胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲an酸(PS)從細胞膜內轉移到細胞膜外，使PS暴露在細胞膜外表面。PS是一種帶負電荷的磷脂，正常主要存在于細胞膜的內面，在細胞發(fā)生凋亡時細胞膜上的這種磷脂分布的不對稱性被破壞而使PS暴露在細胞膜外。Annexin V具有易于結合到磷脂類如PS的特性，對PS有高度的親和性。因此，該蛋白可充當一敏感的探針檢測暴露在細胞膜表面的PS。PS轉移到細胞膜外不是凋亡所的，也可發(fā)生在細胞壞死中。兩種細胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細胞膜是完好的，而細胞壞死在其早期階段細胞膜的完整性就被破壞。7-AAD是一種核酸染料，可進入死細胞內與DNA結合，能夠對壞死和凋亡晚期的細胞進行染色。7-ADD與PI有著相似的熒光特性，但其發(fā)射波譜較PI窄，對其他檢測通道的干擾更小，在多色熒光分析中是PI的替代品，因此通常將Annexin V-PE與ADD配合染色，以區(qū)別凋亡早期細胞與壞死細胞和凋亡的晚期細胞。
操作步驟：
1、細胞樣品的準備：
a．對于貼壁細胞：小心收集細胞培養(yǎng)液到一離心管內備用。用消化細胞，至細胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時，加入前面收集的細胞培養(yǎng)液，吹打下所有的貼壁細胞，并輕輕吹散細胞。再次收集到離心管內。1000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細胞。對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細胞。加入約1ml 4℃預冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞，小心吸除上清。再次加入1ml 4℃預冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞。
b．對于懸浮細胞：1000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細胞。對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細胞。加入約1ml 4℃預冷的PBS，重懸細胞，并轉移到1.5毫升離心管內。再次離心沉淀細胞，小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的PBS，以避免吸走細胞。再次加入1ml 4℃預冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞。
2、用去離子水按1:3稀釋Binding Buffer(4ml Binding Buffer+12ml去離子水)。
3、用250μl Binding Buffer重新懸浮細胞，調節(jié)其濃度為1×106/ml。
4、取 100μl 的細胞懸液于 5ml 流式管中，加入 5μl Annexin V-PE 和 10μl 7-AAD 溶液。
5、混勻后于室溫避光孵育 15 分鐘。
6、在反應管中加400μl PBS，流式細胞儀(FACS)分析。
Jurkat細胞用誘導凋亡后用Annexin V-PE/7AAD雙染流式分析圖譜
儲存條件：2～8℃，避光保存
產(chǎn)品名稱 | Annexin V-PE/7-AAD細胞凋亡流式檢測試劑盒 | 貨號 | CS-C6051 |
英文名稱 | Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit | 規(guī)格 | 50次 |
本試劑盒是一種采用Annexin-PE與7-AAD雙染法進行細胞早期凋亡分析的檢測試劑盒。
公司正在出售的產(chǎn)品：
Caspase 6熒光法檢測試劑盒(AFC) | GFAP 小鼠神經(jīng)膠質纖維性蛋白ELISA檢測試劑盒 |
淋巴細胞分離液1.084 | EMAb 小鼠抗子宮內膜抗體ELISA檢測試劑盒 |
0.5%焦油紫染色液 | MPO 小鼠髓過氧化物ELISA檢測試劑盒 |
蘇木染色液(Gill法) | CsA 小鼠環(huán)孢AELISA檢測試劑盒 |
Percoll | PPAR-γ 小鼠過氧化物體增殖因子活化受體γELISA檢測試劑盒 |
細胞消化液 | ET 小鼠內毒ELISA檢測試劑盒 |
膠原酶I型 | IL-9 小鼠白介9ELISA檢測試劑盒 |
膠原酶II型 | AP12 小鼠apelin 12ELISA檢測試劑盒 |
膠原酶III型 | GDNF 小鼠膠質細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子ELISA檢測試劑盒 |
膠原酶IV型 | ER 小鼠雌二醇受體ELISA檢測試劑盒 |
PBMC樣本密度分離液 | IL-1sRⅠ 小鼠白介1可溶性受體ⅠELISA檢測試劑盒 |
GE Ficoll-Paque PLUS淋巴細胞分離液 | U-TSH 小鼠高靈敏度促甲狀腺激ELISA檢測試劑盒 |
茜紅S染色試劑盒 | DA 小鼠多巴胺ELISA檢測試劑盒 |
Masson三色染色試劑盒 | sLR 大鼠可溶性瘦受體ELISA檢測試劑盒 |
姬姆薩染色液(吉姆薩染液) | cAMP 大鼠ELISA檢測試劑盒 |
細胞生物學研究有以下幾個方面：
細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括：
①細胞核、染色體以及基因表達的研究；
②生物膜與細胞器的研究；
③細胞骨架體系的研究；
④細胞增殖及其調控；
⑤細胞分化及其調控；
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；
⑦細胞的起源與進化；
⑧細胞工程.
細胞生物學研究的常用技術有哪些：
1.顯微技術：包括顯微觀察,顯微操作.
2細胞組分分析技術：離心分離技術,生物大分子定位技術,定量細胞化學分析技術.
3.細胞工程：細胞培養(yǎng)。
