Cell Navigator 細(xì)胞膜染色試劑盒是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于染色細(xì)胞膜的試劑盒，Cell Navigator 細(xì)胞質(zhì)膜染色試劑盒可快速，均勻地標(biāo)記質(zhì)膜，而沒有凝集素表現(xiàn)出的細(xì)胞類型差異。 它可以用作HCS（高含量篩選）的分割工具，以及對細(xì)胞質(zhì)膜進(jìn)行染色以用于標(biāo)準(zhǔn)熒光顯微鏡檢查。 試劑盒中使用的綠色熒光染料可固定但不能通透，因此不適用于還涉及通過抗體探測內(nèi)部靶標(biāo)的實驗。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供的Cell Navigator 細(xì)胞膜染色試劑盒。
| 熒光顯微鏡 | |
| 激發(fā)： | FITC濾波片 |
| 發(fā)射： | FITC濾波片 |
| 推薦孔板： | 黑色透明孔板或載玻片 |
樣品實驗方案
簡要概述
1.在生長培養(yǎng)基中準(zhǔn)備細(xì)胞
2.準(zhǔn)備并向細(xì)胞添加Cellpaint Green工作溶液
3.在37℃下孵育5至20分鐘
4.使用FITC濾光片組讀取熒光強(qiáng)度
溶液配制
1.儲備溶液配制
所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。 避免重復(fù)凍融循環(huán)。
Cellpaint 綠色原液（500X）：
將100 uL DMSO（組分C）添加到Cellpaint Green（組分A）小瓶中，制成500X儲備溶液。 注意：20 µL Cellpaint Green 500X儲備溶液足以用于一個96孔板。 如果管密封嚴(yán)密，可以將未使用的Cellpaint Green 500X儲備溶液分裝并在≤-20oC下保存1個月。 避光并避免重復(fù)的凍融循環(huán)。
2.工作溶液配制
Cellpaint 綠色工作溶液（1X）：
將20 uL的500X儲備溶液添加到10 mL的測定緩沖液（組分B）中，并充分混合。 注意：我們建議在使用前使工作溶液新鮮。
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樣品示例及操作
2.除去每個孔中的工作溶液。 用生理緩沖液（例如HHBS，DPBS或您選擇的緩沖液）洗滌細(xì)胞3次，并替換為HHBS。
3.可選：染色后固定細(xì)胞。 用4％甲醛固定細(xì)胞15-30分鐘。 用生理緩沖液洗滌細(xì)胞三遍。
4.使用帶有FITC濾波片組的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞中的熒光信號。
圖1.在玻片上，Cellpaint Green與Hoechst 33342共染色的HL-60細(xì)胞的熒光圖像。 使用熒光顯微鏡，使用帶有FITC濾鏡的60X油鏡對細(xì)胞成像。 由于來自細(xì)胞邊界上方和下方的膜的所有熒光信號均被不加選擇地捕獲，因此圖像顯得更加刺破和擴(kuò)散。 與常規(guī)的落射熒光成像相比，共聚焦熒光成像比常規(guī)的落射熒光顯微鏡更靈敏，可以為您提供更多的控制。 如果可以使用共聚焦顯微鏡，則可能會獲得清晰的細(xì)胞膜成像。
