產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類(lèi)或臨床診斷
商品屬性：
產(chǎn)品英文名稱(chēng)：Comet Assay Kit (3-Well Slides)
產(chǎn)品中文名稱(chēng)：彗星法DNA損傷分析試劑盒（3孔載玻片）
規(guī)格：15T/75T
貨號(hào)：EY-01X8530
用途：僅供科研研究實(shí)驗(yàn)
特點(diǎn)&優(yōu)勢(shì):
• 試劑齊全：提供的彗星玻片；
• 操作簡(jiǎn)便：無(wú)需用不同熔點(diǎn)瓊脂糖繁瑣鋪膠，可快速、靈敏的檢測(cè)細(xì)胞 DNA 損傷；
• 可靠：相比于多層瓊脂糖，樣本不易脫落。
保存建議:從發(fā)貨之日起，4℃，避光保存 6 個(gè)月
運(yùn)輸條件:藍(lán)冰運(yùn)輸
背景
彗星法 DNA 損傷分析試劑盒（3 孔載玻片）是一種單細(xì)胞凝膠電泳試驗(yàn)（SCGE），快速、靈敏的檢測(cè)細(xì)胞 DNA 損傷的試劑盒。 其檢測(cè)原理是器官或組織經(jīng)處理（如輻射、重金屬等）后，細(xì)胞中的 DNA 發(fā)生單鏈或雙鏈斷裂，將細(xì)胞與融化的瓊脂糖混合加在載玻片上，然后用裂解液破壞細(xì)胞膜，再用堿性溶液使 DNA 解旋，后，對(duì)樣品進(jìn)行電泳，在電場(chǎng)作用下，正常細(xì)胞的大分子 DNA 在電場(chǎng)作用下遷移距離較短，完整 DNA 仍保留在細(xì)胞核的范圍，DNA 斷裂碎片遷移出細(xì)胞核，用 PI 染料染色，在熒光顯微鏡下觀察，完整 DNA 形成圓形或輕微拖尾的圖譜；DNA 斷裂碎片形成彗星狀的電泳圖譜。
本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1.操作簡(jiǎn)便、快捷?？芍苯蛹尤氲綑z測(cè)平板。在96-孔板中檢測(cè)時(shí),無(wú)需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。
2. 無(wú)放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。
3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑來(lái)溶解甲臜產(chǎn)物。
4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進(jìn)一步生成。
公司正在出售的產(chǎn)品：
5(KLK5)重組蛋白 Recombinant Kallikrein 5 (KLK5)
CPA1 Protein Human 重組人 Carboxypeptidase A1 / CPA1 蛋白
CSF1重組小鼠 M-CSF / CSF-1 蛋白 Protein
RBP4 Protein Canine 重組狗 RBP4 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
FAM171B重組人 FAM171B / KIAA1946 蛋白 Protein
小鼠(LZM)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human cysticercosis aibody (CYT Ab) ELISA Kit 人囊蟲(chóng)病抗體(CYT Ab)檢測(cè)試劑盒
Humanvimein,VIMELISAKit 人波形蛋白(VIM)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
guineapigHistamine,HIS檢測(cè)試劑盒豚鼠組胺(HIS)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T
真菌/酵母細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次
Mousecatecholamine,CAELISAKit小鼠兒茶酚胺(CA)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠尿微量白蛋白（ALB）檢測(cè)試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠型纖溶酶原激活物(uPA)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠尿蛋白（UP）檢測(cè)試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠Ⅵ(F6)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： F6 ELISA Kit
Mouse thrombospondin / thrombin sensitive protein 1 (TSP-1) ELISA Kit 小鼠血小板反應(yīng)蛋白/敏感蛋白1(TSP-1)檢測(cè)試劑盒
Ratcross-linkedC-telopeptidesofTypeⅠcollagen,CⅠCPELISAKit 大鼠Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforGOT/GPT(HumanAspaateaminoansferase)ELISAKit人天門(mén)冬轉(zhuǎn)氨酶/谷草轉(zhuǎn)氨酶
細(xì)胞短鏈脂酰氧化酶(acyl-CoAoxidase)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次
Ratthrombomodulin,TMELISAKit大鼠血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T
彗星法DNA損傷分析試劑盒（3孔載玻片）CSF1重組小鼠 M-CSF / CSF-1 蛋白 Protein
5(KLK5)重組蛋白 Recombinant Kallikrein 5 (KLK5)
FAM171B重組人 FAM171B / KIAA1946 蛋白 Protein
CPA1 Protein Human 重組人 Carboxypeptidase A1 / CPA1 蛋白
RBP4 Protein Canine 重組狗 RBP4 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
操作步驟：
(一)獲得目的基因
1、通過(guò)PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。
2、通過(guò)RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。
(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體
1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性?xún)?nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。
2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。
(三) 獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種
1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。
2、 測(cè)序驗(yàn)證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。
3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。
(四)誘導(dǎo)表達(dá)
1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過(guò)夜培養(yǎng)。
2、按1∶50比例稀釋過(guò)夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。
3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對(duì)照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實(shí)驗(yàn)組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。
4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。
5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。
