產(chǎn)品說明：本產(chǎn)品是94 kDa的耐熱性DNA聚合酶及配合其使用的10×PCR Buffer以及6×Loading Buffer。是將改良后的 DNA Polymerase的基因經(jīng)過克隆轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)后，分離純化而得到的性狀優(yōu)良，功能強(qiáng)大的DNA聚合酶。它比天然Taq DNA聚合酶有更加強(qiáng)大的功能以及更加高質(zhì)量的活性。使用本產(chǎn)品擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物的3′端會(huì)進(jìn) 行加“理，因此，PCR產(chǎn)物可直接用于T載體的酶連中。
活性定義：一個(gè)單位（U）的DNA聚合酶的活性定義為在74℃，30分鐘內(nèi)，以活性化的大馬哈魚DNA作為模板/引物，攝入10nmol的全核苷酸所需的酶量。
質(zhì)量控制： SDS-PAGE檢測(cè)純度大于99%；經(jīng)檢測(cè)無外源核酸酶活性；PCR方法檢測(cè)無宿主殘留DNA；能有效擴(kuò)增人類基因組中的單拷貝基因；室溫放置一周，活性無明顯改變。
適用范圍：增、DNA標(biāo)記、DNA序列測(cè)定。
建議的PCR反應(yīng)體系：（以50μl反應(yīng)體系為例）
PD6201-100T Taq DNA polymerase|北京現(xiàn)貨 （擴(kuò)增速度快，性能穩(wěn)定，較好的保真性，用量可酌情增減，較實(shí)惠。）
| 模板DNA（2.5ng-100ng） | 1μl |
| Forward Primer (10 μM) | 2μl |
| Reverse Primer (10 μM) | 2μl |
| dNTP (10 mM ) | 1μl |
| Taq DNA polymerase | 4μl |
| 10×PCR Buffer | 5μl |
| ddH2O | 補(bǔ)足到50μl |
50 μl PCR反應(yīng)體系中模板DNA*使用量
| 大腸桿菌基因組DNA | 10 ng～100 ng |
| λDNA | 0.5 ng～5 ng |
| 質(zhì)粒DNA | 0.1 ng～10 ng |
建議的PCR反應(yīng)條件
| 步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | |
| 預(yù)變性 | 95℃ | 3 min | |
| 變性 | 95℃ | 30 sec | 25-35 cycles |
| 退火 | 50-70℃ | 30 sec | |
| 延伸 | 72℃ | 0.5-5min(0.5min/kb) | |
| 終延伸 | 72℃ | 5min | |
| 保溫 | 4/16℃ | --- |
PD6201-100T Taq DNA polymerase|北京現(xiàn)貨 注意事項(xiàng)：
1、 本產(chǎn)品提供的酶量可進(jìn)行多次反應(yīng)，配置過程應(yīng)將酶盡量放在-20℃冰盒中。
2、PCR的反應(yīng)液請(qǐng)?jiān)诒吓渲?，然后置于PCR擴(kuò)增儀上進(jìn)行PCR反應(yīng)。這種冷啟動(dòng)法（Cool Start Method）可增強(qiáng)PCR擴(kuò)增的特異性，減少PCR過程中的非特異性反應(yīng)，能得到良好的PCR結(jié)果。
3、 PCR反應(yīng)后，加入本產(chǎn)品提供的6×Loading Buffer按5:1混合均勻后加入凝膠孔進(jìn)行電泳。
環(huán)保在線