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人抗子宮內(nèi)膜抗體(EMAb)ELISA試劑盒使用方法

閱讀:318發(fā)布時間:2017-01-05

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檢測范圍:                                                          96T

150pg/ml-4000pg/ml

 

使用目的:

本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中抗子宮內(nèi)膜抗體(EMAb)含量。

實驗原理

       本試劑盒應(yīng)用雙抗夾心法測定標(biāo)本抗子宮內(nèi)膜抗體(EMAb)水平。用純化的抗包被微孔板,制成固相抗,往包被單抗的微孔中依次加入抗子宮內(nèi)膜抗,再與HRP標(biāo)記的原結(jié)合,形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的抗子宮內(nèi)膜抗呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品抗子宮內(nèi)膜抗(EMAb)濃度。

試劑盒組成

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1瓶

7

終止液

6ml×1瓶

2

酶標(biāo)試劑

6ml×1瓶

8

標(biāo)準(zhǔn)品(8000pg/ml)

0.5ml×1瓶

3

標(biāo)包被

12孔×8條

9

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1.5ml×1瓶

4

樣品稀釋液

6ml×1瓶

10

說明書

1份

5

顯色劑A液

6ml×1瓶

11

封板膜

2張  

6

顯色劑B液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1個

標(biāo)本要求 

1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

  • 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

4000pg/ml

5號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2000pg/ml

4號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1000pg/ml

3號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

500pg/ml

2號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

250pg/ml

1號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

 

 

  • 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻
  • 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
  • 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
  • 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
  • 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
  • 溫育:操作同3。
  • 洗滌:操作同5。
  • 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
  • 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)
  • 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值) 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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