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豬弓形蟲(chóng) (Tox)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明

閱讀:328發(fā)布時(shí)間:2017-02-16

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本試劑盒僅供研究使用。

使用目的:

本試劑盒用于測(cè)定豬血清,血漿及相關(guān)液體樣本中弓形蟲(chóng) (Tox)含量。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用間接法測(cè)定標(biāo)本人弓形蟲(chóng) (Tox)水平。用純化的豬弓形蟲(chóng) (Tox)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的弓形蟲(chóng) (Tox)標(biāo)準(zhǔn)品和未知濃度的弓形蟲(chóng) (Tox)待檢樣品,溫育后,加入*標(biāo)記的抗IgG抗體,再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的弓形蟲(chóng) (Tox)抗體呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中豬弓形蟲(chóng) (Tox)濃度。

試劑盒組成 

1

20倍濃縮洗滌液

50ml×1

 

 

9

標(biāo)準(zhǔn)品S1(16U/L)

0.5ml×1

2

鏈霉親和素-HRP

6ml×1

標(biāo)準(zhǔn)品S2(8U/L)

0.5ml×1

3

酶標(biāo)包被板

12孔×8

標(biāo)準(zhǔn)品S3(4U/L)

0.5ml×1

4

*標(biāo)記的抗-IgG抗體

6ml×1

標(biāo)準(zhǔn)品S4(2U/L)

0.5ml×1

5

顯色劑A

6ml×1

標(biāo)準(zhǔn)品S5(1U/L)

0.5ml×1  

6

顯色劑B

6ml×1/

10

密封袋

1個(gè)

7

終止液

6ml×1

11

封板膜

3張

8

樣品稀釋液

6ml×1

12

說(shuō)明書(shū)

1

 

標(biāo)本要求 

1.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

2.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

操作步驟

  • 根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
  • 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣品孔。然后在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl,在樣本反應(yīng)孔中先加入待測(cè)樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl(樣品zui終稀釋度為5倍),蓋上封板膜,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。
  • 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
  • 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)4次,拍干。
  • 加*標(biāo)記的抗-IgG抗體:每孔加入*標(biāo)記的抗-IgG抗體50μl。37℃溫育30分鐘
  • 洗滌:操作同4。
  • 加鏈霉親和素-HRP:每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
  • 洗滌:操作同4。
  • 顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
  • 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
  • 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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