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當前位置:江蘇晶美生物科技有限公司>>技術文章>>Elisa過程材料、試劑配置
1、ELISA板 :于EILSA的產(chǎn)品稱為ELISA板,上標準的微量滴定板為8×12的96孔式,需要購買。常用聚苯乙烯和聚氯乙烯材料。注意:聚苯乙烯材料目前只有進口,特點是孔大,加滿約300ul,此時實驗中所加各試劑(包被液、一抗、二抗、顯色液、終止液等)均為100ul體積。而聚氯乙烯多為國產(chǎn),孔較小,加滿約200ul,此時各試劑只需加50ul體積即可
2、各試劑配制
1)包被液(PH6.3的碳酸鹽緩沖液)無水Na2CO3 0.1696g NaHCO3 0.2856g SW 100ml *溶解至4℃,一周內(nèi)使用
2)PBST配方 NaCl 8.0g Na2HPO4.12H2O 2.9g KCl 0.2g KH2PO4 0.24g TW-20 0.5ml SW 1000ml
3)底物緩沖液 Na2HPO4 3.682g 檸檬酸 1.02g DW 200ml 不需滅菌,4℃保存
4)3% H2O2 30%H2O2 100ml SW 900ml
5)顯色劑 底物緩沖劑 10ml 3%H2O2 150ul OPD 15mg 其中H2O2 zui后加
6)終止液 濃硫酸:SW = 1:8 濃硫酸緩慢加入到SW 中,并攪拌散熱
1 包被:所謂37℃反應,一般取一個37℃的水浴鍋,在水面放一較大泡沫板,將ELISA板臵于泡沫板上即可,其余步驟的37℃反應操作同此; 整個ELISA過程中所有需要較長時間等待的步驟(包被、封閉、加一抗孵育、加二抗孵育)均需要將ELISA包起來再放入冰箱或水浴鍋中,一般可直接用一次性EP手套套起來即可。
2 洗滌:zui常規(guī)的洗滌步驟是洗滌3次,每次間隔5min,具體實驗可能會微調(diào),洗滌次數(shù)可以3-6次不等,間隔5-10min不等; 每次洗滌后要將ELISA板盡可能拍干后在進行下一步操作,尤其是每個洗滌步驟的zui后一次洗滌要盡可能拍干,拍干可在紗布、吸水紙上進行,也可以購買洗板機。
3 顯色:配制顯色液時3%過氧化氫一定要zui后加入,加入混勻后立刻分裝到ELISA板中,即在加過氧化氫前要*完成洗滌的操作; OPD一般在倒數(shù)第二次洗滌前加入,要留有約10min時間以確保OPD*溶解。
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