現(xiàn)在給我十個(gè)八個(gè)的從包被到顯色，一個(gè)工作日基本搞定?？墒窃谛吕鲜植倏v過(guò)程中老是會(huì)泛起或大或小的題目，本人在剛開(kāi)始做ELISA試劑盒時(shí)就面對(duì)良多災(zāi)題，固然有師兄師姐鋪路，但仍是經(jīng)常做得烏煙瘴氣，好比說(shuō)花板，假陽(yáng)性，全顯色，全部顯色，顯色比空缺還低。
   常用封鎖劑有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明膠；脫脂奶粉，比較價(jià)廉，可以高濃度使用（5%－10％）；還有一些稀有用到的各種動(dòng)物血清（主要為了排除相似蛋白干擾）ELISA試劑盒和酪蛋白等等。詳細(xì)的試驗(yàn)還要有堅(jiān)固的理論外也要實(shí)踐，看一下*可不可以應(yīng)用到自己試驗(yàn)當(dāng)中去。但*選用什么，要依據(jù)試驗(yàn)詳細(xì)來(lái)實(shí)踐。

    應(yīng)留意以下原理：因?yàn)榈鞍踪|(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過(guò)物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用，這種物理吸附長(zhǎng)短特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面。小分子必需依賴和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。ELISA試劑盒還有有的包被原可能不是蛋白，對(duì)于*和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對(duì)其改造再加以包被，親和素*:先親和素先包被載體，加入*化的DNA，這種包被方法平均、牢固，已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。