兔胰島素(INS)elisa試劑盒說(shuō)明書(shū)
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中兔胰島素(INS)水平。用純化的兔胰島素(INS)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入胰島素(INS)，再與HRP標(biāo)記的胰島素(INS)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胰島素(INS)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中兔胰島素(INS)濃度。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支，用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
20 mIU/L 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150?l 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150?l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10 mIU/L 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150?l 的 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150?l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
5 mIU/L 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150?l 的 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150?l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.5 mIU/L 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150?l 的 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150?l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.25 mIU/L 1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150?l 的 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150?l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同） 、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。 在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50?l， 待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40?l，然后再加待測(cè)樣品 10?l（樣品zui終稀釋度為 5 倍） 。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50?l，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50?l，再加入顯色劑 B50?l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50?l，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色） 。
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