細(xì)胞簡(jiǎn)介：

巨噬細(xì)胞源自單核細(xì)胞，屬于細(xì)胞，有多種功能，屬不繁殖細(xì)胞群，難以長(zhǎng)期培養(yǎng)。巨噬細(xì)胞在吞噬和異物和衰老死亡細(xì)胞、分泌生物活性物質(zhì)，調(diào)節(jié)血細(xì)胞生成與參與應(yīng)答等方面發(fā)揮著廣泛的生物學(xué)作用，是一類在體內(nèi)發(fā)揮重要效應(yīng)的細(xì)胞，為體內(nèi)的穩(wěn)態(tài)維持和組織防御提供保障。

細(xì)胞特性：

1）細(xì)胞來源于人的正常骨髓組織。

2)細(xì)胞鑒定：CD68或MAC387熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：圓形，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 delf 原代巨噬細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

含，不含丙酮酸鈉，不含酚紅，含HEPES 500ml

大鼠腦多巴胺神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CDNF)elisa檢測(cè)試劑盒

豬腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)elisa分析檢測(cè)試劑盒

人甲狀旁腺1受體(PTH1R)elisa分析檢測(cè)試劑盒

通用型支鏈淀粉比色法定量檢測(cè)試劑盒

SLFNL1抗體  Anti-SLFNL1

環(huán)指蛋白23抗體  Anti-RNF23

核酪蛋白激酶和細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶底物1抗體  Anti-NUCKS1

WEE1蛋白抗體  Anti-WEE1 protein

膜相關(guān)環(huán)指蛋白8抗體 8-Mar

腦特異性POU結(jié)構(gòu)域源盒基因3C抗體 POU4F3

FITC標(biāo)記人CD27單克隆抗體 human CD27/FITC

FLJ40288蛋白抗體 FLJ40288

血小板白細(xì)胞C激酶底物2抗體 PLEK2

液泡蛋白分選蛋白35抗體 VPS35

低密度脂蛋白受體結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體 LDLRAD3

短粗矮胖19蛋白樣1抗體 DPY19L1

糖皮質(zhì)誘導(dǎo)亮拉鏈蛋白抗體 GilZ

頭發(fā)角蛋白KRT33B抗體 KRT33B

Ras蛋白腦組織源類似物RHEB蛋白抗體 RHEB

RNA聚合酶II相關(guān)因子PAF49抗體 PAF49

4號(hào)染色體開放閱讀款 C4orf45

7號(hào)染色體開放閱讀框64抗體 C7orf64

6抗體 KLK6

間變性瘤激酶核相互作用伴侶蛋白抗體 NIPA

腎素化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒

E3泛素蛋白連接酶144B/環(huán)指蛋白144B抗體

IBRDC2

橋連整合因子蛋白抗體

人骨髓巨噬細(xì)胞BIN1