亚洲精品国产v片在线观看,欧美v日韩v国产综合,亚洲av片一区二区三区不卡不,日韩欧美中文在线播放

行業(yè)產(chǎn)品

  • 行業(yè)產(chǎn)品

上海源葉生物科技有限公司


當(dāng)前位置:上海源葉生物科技有限公司>技術(shù)文章>大鼠t-PA ELISA KiT
技術(shù)文章

大鼠t-PA ELISA KiT

閱讀:594發(fā)布時間:2010-1-15

產(chǎn)品編號: EIA06974
使用前*閱讀說明書。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于經(jīng)典酶聯(lián)夾心技術(shù)原理,能測量大鼠組織型纖溶酶原激活劑(t-PA),只能用于研究用途,不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

工作原理
組織型纖溶酶原激活物(tissue-type plasminogen activator, t-PA)是由血管內(nèi)皮細(xì)胞合成并分泌的一種*蛋白酶。目前的研究表明,t-PA具有促進(jìn)纖溶酶原轉(zhuǎn)化為纖溶酶、使纖維蛋白降解而具有防治血栓病及血管移植術(shù)后血栓形成等作用; 但還具有誘導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)降解及膠原酶原激活為膠原酶、促使血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells, VSMC)的遷移與增殖。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒(ELISA)。預(yù)先包被的抗體為多克隆抗體。檢測相抗體也為多克隆抗體,經(jīng)*(biotin)標(biāo)記。樣品和*標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后,PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng);經(jīng)過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關(guān)。

每套試劑盒中內(nèi)容(96T)

材料 數(shù)量
標(biāo)準(zhǔn)品 2vial
預(yù)包被抗體的96孔板 96T ( 8×12)
*標(biāo)記抗體 96T (1:100)
ABC(過氧化物酶標(biāo)記親和素) 96T (1:100)
樣品稀釋液 96T
抗體稀釋液 96T
ABC稀釋液 96T
TMB顯色液A 96T
TMB顯色液B 96T
TMB終止液 96T
ELISA洗滌液 96T(1:25)

需要而未提供的試劑和器材
1. 37℃恒溫箱。
2. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。
3. 自動洗板機(jī)。
4. 單通道或多通道可調(diào)節(jié)移液器以及其吸頭。
5. 蒸餾水,容量瓶等
6. 干凈的試管和Eppendof管。

注意事項
1. 開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。
2. 配制各種試劑時,切記混勻!
3. 用戶在初次使用試劑盒時,應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘,以便試劑集中到管底。
4. 建議所有標(biāo)準(zhǔn)品、樣本都做雙份檢測。
5. 要嚴(yán)格避免操作過程中酶標(biāo)板干燥。干燥會使酶標(biāo)板上生物成份迅速失活!
6. 為免交叉污染,要避免重復(fù)使用手中的吸頭和試管。

洗板方法
手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將推薦的PBS或TBS洗滌緩沖液至少0.35ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復(fù)此過程數(shù)次。
自動洗板:如果有自動洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

樣品的準(zhǔn)備和保存
樣品如果不立即分析,應(yīng)分裝后冷凍保存,且避免反復(fù)凍融。
血清——用干凈試管收集血液,室溫凝固2小時或4℃過夜,離心1000×g 10分鐘,收集血清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
細(xì)胞培養(yǎng)、組織勻漿、體液——離心去除沉淀,立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

樣品稀釋的一般原則
用戶須查閱文獻(xiàn)了解標(biāo)本內(nèi)待測因子的含量,決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù),以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA試劑盒的*檢測范圍。樣品的稀釋應(yīng)有詳細(xì)記錄。

試劑的準(zhǔn)備和保存
A. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋和使用:在使用前2小時內(nèi)準(zhǔn)備。將凍干品管內(nèi)加入1ml樣品稀釋液,*溶解后做倍比稀釋。
稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品在2小時內(nèi)使用。

B.*標(biāo)記抗體工作液:在使用前2小時內(nèi)準(zhǔn)備。
1. 根據(jù)每孔需要0.1ml計算總的用量(實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml)。
2. 按10ul*標(biāo)記抗體加抗體稀釋液990ul的比例配制工作液。輕輕混勻。

C.親和素-過氧化物酶復(fù)合物(ABC)工作液的準(zhǔn)備:在使用前1小時內(nèi)準(zhǔn)備。
1. 根據(jù)每孔需要0.1ml計算總的用量(實配時應(yīng)多配制0.1-0.2ml)。
2. 按10ul親和素-過氧化物酶復(fù)合物(ABC)加ABC稀釋液990ul的比例配制工作液。輕輕混勻。
D. TMB顯色工作液的準(zhǔn)備:在使用之前30分鐘,按TMB顯色液A 9份加 TMB顯色液B 1份的比例配制TMB顯色工作液。

操作程序
1. 確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目。
2. 將倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品各0.1ml依次加入一排7孔中,1孔只加樣品稀釋液的作為對照。處理后的標(biāo)本按100ul每孔加入。
3. 酶標(biāo)板加上蓋,37℃反應(yīng)90分鐘。
4. 反應(yīng)后用自動洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體;或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體,再對著吸水紙拍幾下。洗滌2次。
5. 將準(zhǔn)備好的*抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)60分鐘。
6. 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次,每次浸泡1分鐘左右。
7. 將準(zhǔn)備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)30分鐘。
8. 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次,每次浸泡1-2分鐘左右。
9. 按每孔0.09ml依次加入已在37℃平衡30分鐘的TMB顯色液,37℃避光反應(yīng),反應(yīng)過程中,要經(jīng)常的觀察,當(dāng)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,后3-4孔差別不明顯時,即可加入TMB終止液0.1ml/孔。(顯色反應(yīng)zui長不要超過30分鐘)。
10. 用酶標(biāo)儀在450nm測定O.D.值。
11. 根據(jù)樣品的吸光值在坐標(biāo)上找出對應(yīng)的濃度。用戶也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了N倍,其實際濃度應(yīng)該×N。

操作程序總結(jié):
準(zhǔn)備試劑,樣品和標(biāo)準(zhǔn)品

加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,37℃反應(yīng)90分鐘

洗板2次,加入*化抗體工作液,37℃反應(yīng)60分鐘

洗板3次,加入ABC工作液,37℃反應(yīng)30分鐘

洗板5次,加入TMB顯色液,37℃反應(yīng)

加入TMB終止液

30分鐘之內(nèi)讀OD值

計算標(biāo)本待測因子含量

檢測范圍:10000pg/ml→156pg/ml。
敏感性: <6pg/ml
特異性: 系統(tǒng)和其它細(xì)胞因子無交叉反應(yīng)。
保存: -20℃ [短期內(nèi)(如兩周)可4℃]
有效期: 12個月(-20℃)。
用途: 用于體外定量分析液體標(biāo)本(通用型)。

REFERENCES
1. Scherer, P.E.et al. (1995) J. Biol. Chem. 270:26746.
2. Hu, E.et al. (1996) J. Biol. Chem. 271:10697.
3. Maeda, K.et al. (1996) Biochem. Biophys. Res. Commun. 221:286.
4. Tsao, T-S.et al. (2002) J. Biol. Chem. 277:29359.
5. Fruebis, J.et al. (2001) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98:2005.
6. Berg, A.H.et al. (2001) Nature Med. 7:947.
7. Pajvani, U.T.et al. (2003) J. Biol. Chem. 278:9073.
8. Saito, K.et al. (1999) Gene 229:67.
9. Berg, A.H. and P.E. Scherer (2003) GenBank Accession #NP_653345.
10. Tomas, E.et al. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99:16309.

 


環(huán)保在線 設(shè)計制作,未經(jīng)允許翻錄必究 .? ? ? Copyright(C)?2021 http://www.zuisujiong.cn,All rights reserved.

以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé),環(huán)保在線對此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。 溫馨提示:為規(guī)避購買風(fēng)險,建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

登錄 后再收藏

提示

您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復(fù)您~
| | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | |