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技術(shù)文章

細菌芽孢染色法

閱讀:1378發(fā)布時間:2010-1-27

一、基本原理
  芽孢染色法是利用細菌的芽孢和菌體對染料的親合力不同的原理,用不同染料進行著色,使芽孢和菌體呈不同的顏色而便于區(qū)別。芽孢壁厚、透性低,著色、脫色均較困難,因此,當先用一弱堿性染料,如孔雀綠(malachite green)或堿性品紅(basicfuchsin)在加熱條件下進行染色時,此染料不僅可以進入菌體,而且也可以進入芽孢,進入菌體的染料可經(jīng)水洗脫色,而進入芽孢的染料則難以透出,若再用復染液(如番紅液)或襯托溶液(如黑色素溶液)處理,則菌體和芽孢易于區(qū)分。
二、器材
  枯草芽孢桿菌,蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus),生孢梭菌(Clostridium sporogenes);
  孔雀綠染液,番紅水溶液,*品紅溶液,黑色素溶液等。
三、操作步驟
方法1、
(1)將培養(yǎng)24小時左右的枯草芽孢桿菌或其他芽孢桿菌,作涂片、干燥、固定。
(2)滴加3—5滴孔雀綠染液于已固定的涂片上。
(3)用木夾夾住載玻片在火焰上加熱,使染液冒蒸汽但勿沸騰,切忌使染液蒸干,必要時可添加少許染液。加熱時間從染液冒蒸汽時開始計算約4—5分鐘。這一步也可不加熱,改用飽和的孔雀綠水溶液(約7.6%)染10分鐘。
(4)傾去染液,待玻片冷卻后水洗至孔雀綠不再褪色為止。
(5)用番紅水溶液復染1分鐘,水洗。
(6)待干燥后,置油鏡觀察,芽孢呈綠色,菌體呈紅色。
方法2、
(1)取二支潔凈的小試管,分別加入0.2ml無菌水,再往一管中加入1—2接種環(huán)的蠟狀芽孢桿菌的菌苔,另一管中加入1—2接種環(huán)的生孢梭菌的菌苔,兩管各自充分混合成濃厚的菌懸液。
(2)在菌懸液中分別加入0.2ml*品紅溶液,充分混合后,于沸水浴中加熱3—5分鐘。
(3)用接種環(huán)分別取上述混合液2—3環(huán)于兩片載玻片上,涂薄,風干后,將載玻片稍傾斜于燒杯上,用95%乙醇沖洗至無紅色液流出。
(4)再用自來水沖洗,濾紙吸干。
(5)取1—2接種環(huán)黑色素溶液于涂片處,立即展開涂薄,自然干燥后,油鏡觀察,在淡紫灰色背景的襯托下,菌體為白色,菌體內(nèi)的芽孢為紅色。
四、實驗報告   
 


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