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上海源葉生物科技有限公司
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閱讀:287發(fā)布時(shí)間:2010-10-30
[測(cè)定方法] ELISA法
[方法學(xué)原理] 在微孔板上預(yù)包被純化的柯薩奇病毒抗原,樣本中的CXVAb-IgG可與微孔板上抗原結(jié)合,加入酶標(biāo)抗體后,與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合,在顯色劑作用下顯色,顏色的深淺與樣本中抗體含量呈正相關(guān)。
[標(biāo)本準(zhǔn)備] 靜脈抽血2ml,不抗凝。
[試劑]
1.微孔板
2.樣品稀釋液
3.酶聯(lián)試劑
4.陰性對(duì)照
5.陽性對(duì)照
6.洗滌劑
7.TMB顯色液
8.終止液
[儀器設(shè)備] 酶標(biāo)儀或全自動(dòng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀。
[測(cè)定步驟]
1.取標(biāo)本稀釋液100yl,加入反應(yīng)孔內(nèi)(陰性對(duì)照、陽性對(duì)照直接加入100ul對(duì)照血清),待檢血清各取10ul加入反應(yīng)孔內(nèi),置37℃環(huán)境中反應(yīng)20min。
2.用洗板機(jī)洗滌5次,拍干。
3.每孔加入100tA酶結(jié)合物,置37℃環(huán)境中反應(yīng)20min。
4.洗板5次,拍干。
5.將底物A、B各50u1加入反應(yīng)孔內(nèi),置避光顯色lOmin。
6.每孔加入終止液50rtl,混勻終止反應(yīng)。
7.空白對(duì)照孔調(diào)零,用450nm波長檢測(cè)各孔 OD值,取臨界值(cut off)=0.10+陰性對(duì)照平均OD值(陰性對(duì)照<0.05按o.05計(jì)算)。檢測(cè)標(biāo)本OD值<臨界值時(shí),檢測(cè)結(jié)果為陰性;標(biāo)本檢測(cè)值≥臨界值時(shí),檢測(cè)結(jié)果為陽性。
[正常參考值] CXVAb-IgG陰性
[注意事項(xiàng)]
1.使用前試劑盒應(yīng)預(yù)先在室溫環(huán)境中平衡30min。
2.試劑盒在2~8C避光保存,啟用后應(yīng)盡快用完。
3.不同批次的試劑組分不能混用。
4.實(shí)驗(yàn)后試劑、血清標(biāo)本均應(yīng)視為有傳染性物質(zhì)。
5.用滴瓶滴加時(shí),滴瓶應(yīng)垂直,用力和速度應(yīng)均勻,加樣后充分混勻。
[臨床意義] 柯薩奇病毒特異性抗體IgM出現(xiàn)早,消失也快,該抗體陽性提示現(xiàn)癥感染,有早期診斷價(jià)值。柯薩奇病毒特異性IgG為中和抗體,陽性提示既往感染,但檢測(cè)患者急性期及恢復(fù)期雙份血清抗體效價(jià)升高4倍有診斷意義。
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