柯薩奇病毒（coxsackie virus，CXV）屬微小核糖核酸病毒科的腸道病毒屬。病毒顆粒為球形或卵圓形，直徑22～30nm，基因組為單股線性RNA，構(gòu)成病毒核心?；颊吆徒】祹Ф菊呤强滤_奇病毒的主要傳染源，糞口途徑是主要傳播途徑。該病毒經(jīng)胃腸道或鼻咽部侵人人體后，可導(dǎo)致上呼吸道感染、皰疹性咽炎、肺炎、腦膜炎、肝炎、皮疹、腹瀉、普通感冒、淋巴結(jié)炎、心包炎、心肌炎、流行性肌痛及癱瘓性疾患等。妊娠婦女感染可致多種胎兒畸形?？滤_奇病毒的實(shí)驗(yàn)室診斷主要是其相應(yīng)抗體檢測(cè)。
[測(cè)定方法] ELISA法
[方法學(xué)原理] 將純化的柯薩奇病毒抗原預(yù)包被于微孔板上，若待測(cè)樣本中存在CXVAb—IgM，可與微孔板上抗原相結(jié)合。再加人酶聯(lián)試劑與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合，在顯色劑作用下發(fā)生顯色反應(yīng)，顏色的深淺與樣本中抗體含量呈正相關(guān)。
[標(biāo)本準(zhǔn)備） 靜脈抽血2ml，不抗凝。
[試劑]
1．微孔板
2．樣品稀釋液
3．酶聯(lián)試劑
4．陰性對(duì)照
5．陽性對(duì)照
6．洗滌劑
7．TMB顯色液
8．終止液
[儀器設(shè)備] 酶標(biāo)儀或全自動(dòng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀。
[測(cè)定步驟]
1．取標(biāo)本稀釋液100ul，加入反應(yīng)孔內(nèi)（陰性對(duì)照、陽性對(duì)照直接加入100gl對(duì)照血清），將待檢血清用PBS或生理鹽水進(jìn)行1：20稀釋后取10gl加入反應(yīng)孑L內(nèi)，置37℃環(huán)境中反應(yīng)20min。
2．用洗板機(jī)洗滌5次，拍干。
3．每孔加入100gl酶結(jié)合物，置37℃環(huán)境中反應(yīng)20rain。
4．洗板5次，拍干。
5．將底物A、B各50u1加入反應(yīng)孔內(nèi)，置避光顯色10min。
6．每孔加入終止液50gl，混勻終止反應(yīng)。
7．空白對(duì)照孔調(diào)零，用450nm波長檢測(cè)各孔OD值。臨界值（cut off）：0．2十陰性對(duì)照平均OD值（陰性對(duì)照<0．05按0．05計(jì)算）。檢測(cè)標(biāo)本OD值<臨界值時(shí)，檢測(cè)結(jié)果為陰性；檢測(cè)標(biāo)本值≥臨界值時(shí)，檢測(cè)結(jié)果為陽性。
[正常參考值） CXVAb—IgM陰性
[注意事項(xiàng)]
1．使用前試劑盒應(yīng)預(yù)先在室溫環(huán)境中平衡30min。
2．試劑盒在2～8℃避光保存，啟用后應(yīng)盡快用完。
3．不同批次的試劑組分不能混用。
4．實(shí)驗(yàn)后試劑、血清標(biāo)本均應(yīng)視為有傳染性物質(zhì)。
5．用滴瓶滴加時(shí)，滴瓶應(yīng)垂直，用力和速度應(yīng)均勻，加樣后充分混勻。
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