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上海源葉生物科技有限公司
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閱讀:336發(fā)布時(shí)間:2010-10-30
柯薩奇病毒(coxsackie virus,CXV)屬微小核糖核酸病毒科的腸道病毒屬。病毒顆粒為球形或卵圓形,直徑22~30nm,基因組為單股線性RNA,構(gòu)成病毒核心?;颊吆徒】祹Ф菊呤强滤_奇病毒的主要傳染源,糞口途徑是主要傳播途徑。該病毒經(jīng)胃腸道或鼻咽部侵人人體后,可導(dǎo)致上呼吸道感染、皰疹性咽炎、肺炎、腦膜炎、肝炎、皮疹、腹瀉、普通感冒、淋巴結(jié)炎、心包炎、心肌炎、流行性肌痛及癱瘓性疾患等。妊娠婦女感染可致多種胎兒畸形??滤_奇病毒的實(shí)驗(yàn)室診斷主要是其相應(yīng)抗體檢測(cè)。
[測(cè)定方法] ELISA法
[方法學(xué)原理] 將純化的柯薩奇病毒抗原預(yù)包被于微孔板上,若待測(cè)樣本中存在CXVAb—IgM,可與微孔板上抗原相結(jié)合。再加人酶聯(lián)試劑與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合,在顯色劑作用下發(fā)生顯色反應(yīng),顏色的深淺與樣本中抗體含量呈正相關(guān)。
[標(biāo)本準(zhǔn)備) 靜脈抽血2ml,不抗凝。
[試劑]
1.微孔板
2.樣品稀釋液
3.酶聯(lián)試劑
4.陰性對(duì)照
5.陽性對(duì)照
6.洗滌劑
7.TMB顯色液
8.終止液
[儀器設(shè)備] 酶標(biāo)儀或全自動(dòng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀。
[測(cè)定步驟]
1.取標(biāo)本稀釋液100ul,加入反應(yīng)孔內(nèi)(陰性對(duì)照、陽性對(duì)照直接加入100gl對(duì)照血清),將待檢血清用PBS或生理鹽水進(jìn)行1:20稀釋后取10gl加入反應(yīng)孑L內(nèi),置37℃環(huán)境中反應(yīng)20min。
2.用洗板機(jī)洗滌5次,拍干。
3.每孔加入100gl酶結(jié)合物,置37℃環(huán)境中反應(yīng)20rain。
4.洗板5次,拍干。
5.將底物A、B各50u1加入反應(yīng)孔內(nèi),置避光顯色10min。
6.每孔加入終止液50gl,混勻終止反應(yīng)。
7.空白對(duì)照孔調(diào)零,用450nm波長檢測(cè)各孔OD值。臨界值(cut off):0.2十陰性對(duì)照平均OD值(陰性對(duì)照<0.05按0.05計(jì)算)。檢測(cè)標(biāo)本OD值<臨界值時(shí),檢測(cè)結(jié)果為陰性;檢測(cè)標(biāo)本值≥臨界值時(shí),檢測(cè)結(jié)果為陽性。
[正常參考值) CXVAb—IgM陰性
[注意事項(xiàng)]
1.使用前試劑盒應(yīng)預(yù)先在室溫環(huán)境中平衡30min。
2.試劑盒在2~8℃避光保存,啟用后應(yīng)盡快用完。
3.不同批次的試劑組分不能混用。
4.實(shí)驗(yàn)后試劑、血清標(biāo)本均應(yīng)視為有傳染性物質(zhì)。
5.用滴瓶滴加時(shí),滴瓶應(yīng)垂直,用力和速度應(yīng)均勻,加樣后充分混勻。
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