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技術文章

柯薩奇病毒抗體IgM(CXV Ab-IgM)檢測

閱讀:335發(fā)布時間:2010-10-30

柯薩奇病毒(coxsackie virus,CXV)屬微小核糖核酸病毒科的腸道病毒屬。病毒顆粒為球形或卵圓形,直徑22~30nm,基因組為單股線性RNA,構(gòu)成病毒核心。患者和健康帶毒者是柯薩奇病毒的主要傳染源,糞口途徑是主要傳播途徑。該病毒經(jīng)胃腸道或鼻咽部侵人人體后,可導致上呼吸道感染、皰疹性咽炎、肺炎、腦膜炎、肝炎、皮疹、腹瀉、普通感冒、淋巴結(jié)炎、心包炎、心肌炎、流行性肌痛及癱瘓性疾患等。妊娠婦女感染可致多種胎兒畸形??滤_奇病毒的實驗室診斷主要是其相應抗體檢測。
[測定方法] ELISA法
[方法學原理] 將純化的柯薩奇病毒抗原預包被于微孔板上,若待測樣本中存在CXVAb—IgM,可與微孔板上抗原相結(jié)合。再加人酶聯(lián)試劑與抗原抗體復合物結(jié)合,在顯色劑作用下發(fā)生顯色反應,顏色的深淺與樣本中抗體含量呈正相關。
[標本準備) 靜脈抽血2ml,不抗凝。
[試劑]
1.微孔板
2.樣品稀釋液
3.酶聯(lián)試劑
4.陰性對照
5.陽性對照
6.洗滌劑
7.TMB顯色液
8.終止液
[儀器設備] 酶標儀或全自動酶聯(lián)免疫檢測儀。
[測定步驟]
1.取標本稀釋液100ul,加入反應孔內(nèi)(陰性對照、陽性對照直接加入100gl對照血清),將待檢血清用PBS或生理鹽水進行1:20稀釋后取10gl加入反應孑L內(nèi),置37℃環(huán)境中反應20min。
2.用洗板機洗滌5次,拍干。
3.每孔加入100gl酶結(jié)合物,置37℃環(huán)境中反應20rain。
4.洗板5次,拍干。
5.將底物A、B各50u1加入反應孔內(nèi),置避光顯色10min。
6.每孔加入終止液50gl,混勻終止反應。
7.空白對照孔調(diào)零,用450nm波長檢測各孔OD值。臨界值(cut off):0.2十陰性對照平均OD值(陰性對照<0.05按0.05計算)。檢測標本OD值<臨界值時,檢測結(jié)果為陰性;檢測標本值≥臨界值時,檢測結(jié)果為陽性。
[正常參考值) CXVAb—IgM陰性
[注意事項]
1.使用前試劑盒應預先在室溫環(huán)境中平衡30min。
2.試劑盒在2~8℃避光保存,啟用后應盡快用完。
3.不同批次的試劑組分不能混用。
4.實驗后試劑、血清標本均應視為有傳染性物質(zhì)。
5.用滴瓶滴加時,滴瓶應垂直,用力和速度應均勻,加樣后充分混勻。

 


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