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上海源葉生物科技有限公司
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經(jīng)營(yíng)模式:生產(chǎn)廠(chǎng)家
商鋪產(chǎn)品:7306條
所在地區(qū):上海上海市
聯(lián)系人:陳小姐
閱讀:323發(fā)布時(shí)間:2010-11-6
[測(cè)定方法] 免疫印跡法(或蛋白印跡法)
[方法學(xué)原理] 將純化的確診HIV蛋白抗原裂解,然后通過(guò)SDS-PAGE按分子量大小將其分離,再轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素薄膜上,并保存于4℃干燥試管內(nèi),測(cè)定時(shí)將割成膜條的硝酸纖維素薄膜與待檢樣品反應(yīng),使其充分接觸。若樣品中含有HIV抗體,將會(huì)與膜條上的抗原區(qū)帶結(jié)合,再加上酶標(biāo)抗人IgG抗體,經(jīng)過(guò)與底物反應(yīng)顯色,即可形成肉眼可見(jiàn)的不同區(qū)帶。
[標(biāo)本準(zhǔn)備] 靜脈抽血2ml,不抗凝。
[試劑]
1.轉(zhuǎn)印有HIV I型和Ⅱ型抗原的硝酸纖維素薄膜
2.酶聯(lián)結(jié)合物
3.底物及底物緩沖液
4.洗滌液
5.穩(wěn)定液
[測(cè)定步驟]
1.在免疫印跡法反應(yīng)槽內(nèi),加入3ml洗滌液。加入待測(cè)樣品ul,混勻。
2.在反應(yīng)槽內(nèi)加入含HIV抗原的硝酸纖維素薄膜液,在室溫環(huán)境中振搖2h,每份樣品為l條。每次測(cè)定需附陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照。在振搖過(guò)程中,應(yīng)使膜條帶有號(hào)碼的一面始終保持向上。
3.傾去槽內(nèi)的反應(yīng)液,用洗滌液將各膜條洗5次,每次3min。
4.在各反應(yīng)槽內(nèi)加酶聯(lián)試劑,于室溫環(huán)境中再振搖lh,用洗滌液洗4次,zui后用底物緩沖液洗1次。
5.將底物溶液配好后,加入反應(yīng)槽內(nèi)并振搖數(shù)分鐘,待陽(yáng)性對(duì)照出現(xiàn)典型的HIV抗體陽(yáng)性區(qū)帶后,迅速傾去底物溶液,并加入穩(wěn)定液繼續(xù)振搖30min。然后將膜條取出,避光晾干,判斷結(jié)果。
6.結(jié)果判斷:確認(rèn)試驗(yàn)的結(jié)果判定可根據(jù)世界衛(wèi)生組織推薦的標(biāo)準(zhǔn),即陽(yáng)性至少1條env帶和1條pol帶;或至少1條env帶和1條、gag帶;或至少1條env帶、1條gag帶和1條pol帶;或至少2條env帶;陰性:無(wú)病毒特異帶??梢桑?條gag帶和1條pol帶,或只有g(shù)ag帶或poi帶。
[臨床意義] 免疫印跡法是目前*的確診HIV感染的方法,若檢出3個(gè)HIV主要基因(gag、poi、env)產(chǎn)物的抗體為陽(yáng)性時(shí),可確診為HIV感染。
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