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技術(shù)文章

單純皰疹Ⅱ型抗體IgG(HSVⅡAb-IgG)檢測

閱讀:593發(fā)布時間:2010-11-10

[測定方法] ELISA法
[方法學(xué)原理] 在微孔表面包被純化的HSV抗原。被稀釋過的患者血清加入微孔中。如存在HSV-ⅡAb—IgG可與微孔上抗原相結(jié)合。然后洗去未結(jié)合物質(zhì),再加入酶聯(lián)液,與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合。洗去過量的酶聯(lián)液。zui后加入底物和色原(顯色液)。在特定時間終止酶聯(lián)液的催化反應(yīng)。所產(chǎn)生的顏色強(qiáng)度與標(biāo)本中HSV—ⅡAb-IgG含量呈正相關(guān)。通過酶標(biāo)儀與校正和對照相比,讀出結(jié)果。
[標(biāo)本準(zhǔn)備] 靜脈抽血2ml,不抗凝。
[試劑]
1.微孔板
2.樣品稀釋液
3.HRP-抗人IgG酶結(jié)合物
4.陰性對照
5.陽性對照
6.洗滌劑
7.TMB顯色液
8.終止液
[儀器設(shè)備] 酶標(biāo)儀或全自動酶聯(lián)免疫檢測儀。
[測定步驟]
1.吸取5ul血清標(biāo)本加入250ul標(biāo)本稀釋液中,做1:51稀釋。
2.吸取100ul稀釋過的血清、陽性對照、陰性對照和校正液(不稀釋),加入微孔板內(nèi),設(shè)空白對照1孔。振蕩混勻,去除孔內(nèi)液體中氣泡,室溫環(huán)境中孵育20min。
3.棄去孔內(nèi)液體,用洗滌液洗5次。
4.每孔再加入100ul酶聯(lián)結(jié)合物,室溫環(huán)境中孵育20rain。
5.棄去孔中酶聯(lián)液,用洗滌液洗5次。
6.每孔加入100ul TMB顯色液,室溫環(huán)境中孵育10min。
7.每孔加人100rd終止液,終止反應(yīng),充分混勻。
8.用酶標(biāo)儀(波長為450nm)讀取吸光度。以待測樣本吸光度大于校正液孔吸光度為陽性。
[注意事項]
1.整個檢測過程應(yīng)符合實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量手冊和生物安全守則規(guī)定,嚴(yán)防交叉污染。
2.所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
3.試劑應(yīng)保存于2~8℃冰箱,使用前應(yīng)在室溫環(huán)境中平衡30rain。
4.洗滌時各孔均應(yīng)加滿洗滌液,防止孔內(nèi)有游離酶未洗凈,每次洗板后均應(yīng)在吸水紙上拍干。
5.血標(biāo)本應(yīng)分離出血清保存,2~8℃可保存?d,冷凍保存可至6個月,避免反復(fù)凍融。
6.試劑在儲存或使用過程中,禁止過熱、曝曬或強(qiáng)光。
[正常參考值] HSV—ⅡAb-IgG陰性
[臨床意義] HSV先天性感染主要是通過胎盤引起宮內(nèi)感染,誘發(fā)早產(chǎn)、死胎、胎兒畸形及腦、眼等多器官損害。HSV也可通過呼吸道或產(chǎn)道造成新生兒感染,可呈無癥狀隱性感染,也可引起不同形式或不同程度的臨床表現(xiàn),輕者僅為口腔、皮膚、眼部皰疹,重者則呈中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染甚至全身性播散性感染。
HSVAb-IgM陽性提示為患者感染早期或原發(fā)性感染。但I(xiàn)gM抗體因在檢測過程中易受各種因素的影響,出現(xiàn)假陰性結(jié)果,因此HSVAb—IgM陰性結(jié)果不能*排除HSV感染。HSVAb—IgG陽性,說明曾經(jīng)感染這種病原體,具有一定免疫力。連續(xù)監(jiān)測IgG抗體水平,若IgG迅速升高到4倍以上的較高水平時,患者可能為HSV再次感染。
在HSV的兩個亞型中,HSV-I型主要通過呼吸道或與患者病損部位直接接觸而傳播,引起呼吸系統(tǒng)、皮膚黏膜病變,妊娠婦女感染該病毒可引起宮內(nèi)感染;HSV-Ⅱ型主要通過接吻和性交傳播,引起性器官病變和新生兒感染。
 


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