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上海源葉生物科技有限公司
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閱讀:650發(fā)布時(shí)間:2010-11-17
[測(cè)定方法] ELISA法
[方法學(xué)原理] 將戊型肝炎病毒(HEV)特異性抗原預(yù)包被于微孔反應(yīng)板上,樣品加入已有樣品稀釋液的反應(yīng)孔中,在隨后的溫育過(guò)程中,若樣品中含特異性抗體(HEVAb-IgG),則該抗體與包被抗原形成抗原—抗體復(fù)合物被吸附到微孔板上,再加入酶標(biāo)記的第2抗體,zui終形成抗原—抗體—酶標(biāo)記第2抗體復(fù)合物,洗滌除去未結(jié)合的游離酶,加入顯色劑后顯色。反之,若樣品中不含特異性抗體(HEVAb-IgG),則加入顯色劑后不顯色。
[標(biāo)本準(zhǔn)備] 靜脈抽血2ml,不抗凝。
[試劑]
1.包被反應(yīng)板
2.樣品稀釋液
3.陰性對(duì)照
4.陽(yáng)性對(duì)照
5.洗滌劑
6.酶標(biāo)記第2抗體
7.顯色劑A、B
8.終止液
[儀器設(shè)備] 酶標(biāo)儀或全自動(dòng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀。
[測(cè)定步驟]
1.用加樣器在微孔反應(yīng)條板孔中加入樣品稀釋液,每孔100u1。
2.將待測(cè)標(biāo)本各10ul分別加入已有樣品稀釋液的各孔中,直接加陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照各100u1,設(shè)空白對(duì)照1孔。
3.充分混勻,37℃環(huán)境中溫育20min。
4.傾去內(nèi)容物,用洗滌液洗板5次,確保每次吸凈無(wú)殘留,全部洗完后在吸水紙上用力拍干。
5.各孔加入酶標(biāo)記第2抗體100ul,振蕩混勻。
6.傾去內(nèi)容物,用洗滌液洗板5次,確保每次吸凈無(wú)殘留,全部洗完后在吸水紙上用力拍干。
7.每孔加入顯色劑A、B各1滴,顯色10rain。
8.終止顯色后,在酶標(biāo)儀上比色(波長(zhǎng)為450nm),樣品吸光度大于陰性對(duì)照2.1倍者為陽(yáng)性。
[注意事項(xiàng)]
1.整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)符合實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量手冊(cè)和生物安全守則規(guī)定,嚴(yán)防交叉污染。
2.所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
3.試劑應(yīng)保存于2~8℃冰箱,使用前應(yīng)在室溫環(huán)境中平衡30min。
4.洗滌時(shí)各孔均應(yīng)加滿洗滌液,防止孔內(nèi)有游離酶未洗凈,每次洗板后均應(yīng)在吸水紙上扣干。
[正常參考值] HEVAbqgG陰性
[臨床意義] HEVAb-IgG陽(yáng)性出現(xiàn)時(shí)間較HEVAb-IgM略晚,但持續(xù)時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng),個(gè)別患者病愈14年后HEVAb-IgG仍為陽(yáng)性。一般HEVAb—IgG于急性期含量較高,恢復(fù)期則明顯下降,經(jīng)過(guò)一定時(shí)期后,有相當(dāng)比例患者的抗HEVAb-IgG消失,并非終身存在。因此,檢測(cè)HEVAb-IgG并不能*反映人群既往感染水平。
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