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凝膠等電聚焦載體兩性電解質(zhì)的理化性質(zhì)pH值范圍與用量選擇

閱讀:1089發(fā)布時(shí)間:2010-11-24

載體兩性電解質(zhì)的理化性質(zhì) 載體兩性電解質(zhì)(carrier ampholyte)是一種脂肪族多胺基多羧基的混合物(其商品名為Ampholine)。它的pK和pI值各自相異卻又相近,即它是由異構(gòu)物和同系物組成。

(一)緩沖性能強(qiáng)
Ampholine溶液在一定pH值范圍內(nèi)有充分的緩沖能力,當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)分子進(jìn)入與其等電點(diǎn)相應(yīng)的pH值區(qū)域時(shí),pH值并無變化。

(二)導(dǎo)電性能好
Ampholine溶液有均衡的電場(chǎng)強(qiáng)度,但是在pH值等于中性的區(qū)域?qū)щ娦阅茌^差。因此在應(yīng)用時(shí),不管選擇什么pH值范圍,一般都要加入占其總量1/10的pH值為6~8的Ampholine溶液,以保持電場(chǎng)強(qiáng)度的均勻性。

(三)分子質(zhì)量小
Ampholine一般分子質(zhì)量都在0.3~1kDa之間。這對(duì)利用層析法(如葡萄糖G—25凝膠過濾)把它和蛋白質(zhì)分開是方便的。

(四)紫外吸收值低
Ampholine對(duì)于在280nm處測(cè)定蛋白質(zhì)吸收值干擾小。但是,如果蛋白質(zhì)濃度低,Ampholine用量又高,則往往有干擾,操作時(shí)應(yīng)進(jìn)行校正。

(五)一般與樣品不起化學(xué)反應(yīng)

載體兩性電解質(zhì)的pH值范圍與用量選擇 兩性電解質(zhì)的pH值范圍選擇得當(dāng),分辨率可提高。在測(cè)定未知樣品的等電點(diǎn)時(shí),可先采用pH值為3—10的兩性電解質(zhì)摸索,待初步測(cè)出等電點(diǎn)后,再改用包括樣品pI值、pH值范圍窄的兩性電解質(zhì)。

兩性電解質(zhì)一般都為40%的水溶液,電聚焦的用量通常為1%一2%。實(shí)驗(yàn)表明,兩性電解質(zhì)用量小時(shí),電聚焦后形成的pH值梯度較其本身的pH梯度寬;相反,用量大時(shí),電聚焦后形成的pH梯度與其本身的pH梯度近似。此外,電聚焦的時(shí)間直接影響pH梯度的變化,時(shí)間過長(zhǎng)或過短都不會(huì)產(chǎn)生平滑的曲線,所以電聚焦時(shí)間應(yīng)嚴(yán)格控制,才能得到分辨率高的電泳圖譜,一般電泳時(shí)間以6—7h為宜。此外,聚丙烯酰胺的純度也會(huì)影響pH梯度。


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