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凝膠等電聚焦載體兩性電解質的理化性質pH值范圍與用量選擇

閱讀:1088發(fā)布時間:2010-11-24

載體兩性電解質的理化性質 載體兩性電解質(carrier ampholyte)是一種脂肪族多胺基多羧基的混合物(其商品名為Ampholine)。它的pK和pI值各自相異卻又相近,即它是由異構物和同系物組成。

(一)緩沖性能強
Ampholine溶液在一定pH值范圍內有充分的緩沖能力,當?shù)鞍踪|分子進入與其等電點相應的pH值區(qū)域時,pH值并無變化。

(二)導電性能好
Ampholine溶液有均衡的電場強度,但是在pH值等于中性的區(qū)域導電性能較差。因此在應用時,不管選擇什么pH值范圍,一般都要加入占其總量1/10的pH值為6~8的Ampholine溶液,以保持電場強度的均勻性。

(三)分子質量小
Ampholine一般分子質量都在0.3~1kDa之間。這對利用層析法(如葡萄糖G—25凝膠過濾)把它和蛋白質分開是方便的。

(四)紫外吸收值低
Ampholine對于在280nm處測定蛋白質吸收值干擾小。但是,如果蛋白質濃度低,Ampholine用量又高,則往往有干擾,操作時應進行校正。

(五)一般與樣品不起化學反應

載體兩性電解質的pH值范圍與用量選擇 兩性電解質的pH值范圍選擇得當,分辨率可提高。在測定未知樣品的等電點時,可先采用pH值為3—10的兩性電解質摸索,待初步測出等電點后,再改用包括樣品pI值、pH值范圍窄的兩性電解質。

兩性電解質一般都為40%的水溶液,電聚焦的用量通常為1%一2%。實驗表明,兩性電解質用量小時,電聚焦后形成的pH值梯度較其本身的pH梯度寬;相反,用量大時,電聚焦后形成的pH梯度與其本身的pH梯度近似。此外,電聚焦的時間直接影響pH梯度的變化,時間過長或過短都不會產(chǎn)生平滑的曲線,所以電聚焦時間應嚴格控制,才能得到分辨率高的電泳圖譜,一般電泳時間以6—7h為宜。此外,聚丙烯酰胺的純度也會影響pH梯度。


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