自1967年以來，人們習(xí)慣把等電點(diǎn)聚焦簡(jiǎn)稱電聚焦（isoelectrofocusing，IEF）。電聚焦電泳法是在一定抗對(duì)流介質(zhì)（如凝膠）中加入兩性電解質(zhì)載體，直流電通過時(shí)便形成一個(gè)由陽極到陰極pH值逐步上升的梯度。這種梯度稱為載體兩性電解質(zhì)pH梯度（carrierampholytepHgradient），若將緩沖基團(tuán)變?yōu)槟z介質(zhì)的一部分，形成的pH梯度稱固相pH梯度（immobilizedpHgradient，IPG）。兩性化合物在此電泳過程中就被濃集在與其等電點(diǎn)相等的pH區(qū)域，從而使不同化合物能按其各自等電點(diǎn)得到分離。從分辨率看，采用固相pH梯度介質(zhì)的效果較好。
鑒于電聚焦電泳法有濃縮效應(yīng)、分辨率高、操作方便、設(shè)備簡(jiǎn)單和費(fèi)時(shí)少等特點(diǎn)，它在蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)測(cè)定、純度分析以及制備電泳純樣品等方面已得到較廣泛的應(yīng)用，但對(duì)于在等電點(diǎn)時(shí)發(fā)生沉淀或變性的樣品卻不適用。
（一）pH梯度的形成
若將pK和pI值各自相異卻又相近的兩性電解質(zhì)溶液傾倒入電泳支持物中，當(dāng)電流通過時(shí)，等電點(diǎn)zui小的兩性電解質(zhì)（pI1）在中性溶液介質(zhì)中發(fā)生解離，帶負(fù)電荷，向以硫酸為電極溶液的正極方向泳動(dòng)。當(dāng)它泳動(dòng)到陽性端支持物時(shí)，與正極溶液電離出來的H+中和失去電荷，停止泳動(dòng)，這時(shí)緩沖力大的載體兩性電解質(zhì)就使周圍溶液的pH等于其等電點(diǎn)pI1。同理，等電點(diǎn)稍大的兩性電解質(zhì)（pI2）也向正極移動(dòng)，當(dāng)泳動(dòng)到等電點(diǎn)zui小的兩性電解質(zhì)（pI1）陰時(shí)，就不能再向前泳動(dòng)。如果穿過pI1區(qū)域，則pI2兩性電解質(zhì)帶正電荷，反過來向陰極移動(dòng)。所以該電解質(zhì)一定位于pI1的陰。依此類推，經(jīng)過適當(dāng)時(shí)間的電泳后，pK和pI值各自相異卻又相近的兩性電解質(zhì)將依等電點(diǎn)遞增的次序在支持物中正極排向負(fù)極，彼此互相銜接，形成一個(gè)平滑穩(wěn)定的由正極向負(fù)極逐漸上升的pH梯度。
（二）電聚焦分離蛋白質(zhì)的過程
蛋白質(zhì)是典型的兩性電解質(zhì)，它所帶的電荷隨著溶液酸堿度的變化而變化，即在酸性溶液中帶正電荷，在堿性溶液中帶負(fù)電荷。因此，蛋白質(zhì)在外加電場(chǎng)作用下向正極，或向負(fù)極泳動(dòng)。例如，當(dāng)一個(gè)等電點(diǎn)為pIa的蛋白質(zhì)置于從正極向負(fù)極逐漸遞增的穩(wěn)定平滑pH梯度支持物的陰時(shí)，因?yàn)樘幵趬A性環(huán)境中帶負(fù)電荷，故在電場(chǎng)作用下向正極移動(dòng)，當(dāng)泳動(dòng)到pH值等于其pIa的區(qū)域時(shí)，泳動(dòng)將停止。如果將此蛋白質(zhì)放在陽，則帶正電荷，向負(fù)極移動(dòng)，zui后也會(huì)泳動(dòng)到與其等電點(diǎn)相等的pH值區(qū)域。因此，無論把蛋白質(zhì)放在支持物的哪個(gè)位置上，在電場(chǎng)作用下都會(huì)聚焦在pH＝pIa的地方，這種行為叫聚焦作用。同理，如將等電點(diǎn)分別為pI1，pI2……pIa的蛋白質(zhì)混合物置于pH梯度支持物中，在電場(chǎng)作用下經(jīng)過適當(dāng)時(shí)間的電泳，其各組分將分別聚焦在支持物中pH值等于各自等電點(diǎn)的區(qū)域，形成一條一條的蛋白質(zhì)區(qū)帶，這既是等電聚焦分離蛋白質(zhì)的過程，也是等電聚焦的基本原理。
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