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閱讀:695發(fā)布時間:2010-12-25
1.雜交瘤細(xì)胞的凍存 及時凍存原始孔的雜交瘤細(xì)胞每次克隆化得到的亞克隆細(xì)胞是十分重要的。因為在沒有建立一個穩(wěn)定分泌抗體的細(xì)胞系時,細(xì)胞培養(yǎng)過程中隨時可能發(fā)生細(xì)胞的污染、分泌抗體能力的喪失等等。如果沒有原始細(xì)胞.的凍存,則可因上述意外而前功盡棄。雜交瘤細(xì)胞的凍存方法同其他細(xì)胞系一樣,原則上海支安瓿含1×106個以上個細(xì)胞,但對原始孔的雜交瘤細(xì)胞可以因培養(yǎng)環(huán)境不同而改變,在24孔培養(yǎng)板中培養(yǎng),當(dāng)長滿孔底時,1孔就可以裝1支安瓿凍存。細(xì)胞凍存液為50%小牛血清、40%不*培養(yǎng)液、10%DMSO。凍存液預(yù)冷,操作動作輕柔、迅速。凍存時從室溫降至0℃后放人一70℃超低溫冰箱,次日轉(zhuǎn)入液氮中。也可用細(xì)胞凍存裝置進行凍存。凍存細(xì)胞要定期復(fù)蘇,檢查細(xì)胞的活性和分泌抗體的穩(wěn)定性,在液氮中細(xì)胞可保存數(shù)年或更長時間。
2.細(xì)胞復(fù)蘇方法 將玻璃安瓿自液氮中小心取出,放37℃水浴中,在Irain內(nèi)使凍存的細(xì)胞解凍,將細(xì)胞用*培養(yǎng)液洗滌兩次,然后移人前一天已制備好的飼養(yǎng)層細(xì)胞的培養(yǎng)瓶內(nèi),置37℃、5%C02孵箱中培養(yǎng),當(dāng)細(xì)胞形成集落時,檢測抗體活性。
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