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上海酶聯(lián)生物研究所


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所在地區(qū)：上海上海市

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技術(shù)文章

96T人p38絲裂原活化蛋白激酶

閱讀：186發(fā)布時(shí)間：2012-8-6

人p38絲裂原活化蛋白激酶

本試劑盒僅供研究使用      標(biāo)本：細(xì)胞上清液

二、注意事項(xiàng)
1.  此試劑為體外檢測(cè)試劑，效期內(nèi)使用，試劑應(yīng)視為傳染物，不同總批號(hào)的試劑不能混用。
使用前應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出。室溫放置至少30分鐘，
濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶后，請(qǐng)于37℃孵育15分鐘。
濃縮樣品稀釋液出現(xiàn)結(jié)晶后，請(qǐng)于37℃孵育15分鐘
若24小時(shí)內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，標(biāo)本可存放于2～8℃。不需及時(shí)實(shí)驗(yàn)，標(biāo)本-20℃保存，避免反復(fù)凍融。
在反復(fù)清洗微孔板，并扣干微孔中的殘余液體，否則將降低度，造成吸光度偏離的假像。
加樣完畢后，應(yīng)注意輕微搖動(dòng)微孔反應(yīng)條，以便使孔中的液體充分混勻。
試劑盒保存于2～8℃，請(qǐng)勿冷凍，有效期請(qǐng)見(jiàn)盒內(nèi)標(biāo)示。

人p38絲裂原活化蛋白激酶

三、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
1．使用前應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出，室溫放置至少30分鐘。
2．準(zhǔn)備各種實(shí)驗(yàn)儀器及材料，如微量移液器，吸頭，醫(yī)用蒸餾水等
3．濃縮洗液與醫(yī)用蒸餾水1︰19倍稀釋后成為應(yīng)用洗滌液
4．濃縮樣品稀釋液與醫(yī)用蒸餾水1︰4倍稀釋成應(yīng)用樣品稀釋液
5．用應(yīng)用樣品稀釋液來(lái)稀釋樣品，按照1：100的體積比來(lái)稀釋樣品如10μl的樣品加入到1ml的應(yīng)用樣品稀釋液中，充分混勻待用。）

人p38絲裂原活化蛋白激酶

四、操 作 步 驟
1．取出酶標(biāo)板，設(shè)空白孔，依照次序?qū)?yīng)分別加入100μl的標(biāo)準(zhǔn)品于空白微孔中（空白孔視為0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品，用醫(yī)用蒸餾水替代）
2、分別標(biāo)記樣品編號(hào)，加入100μl的稀釋樣品于空白微孔中（不同的樣本采用不同的吸頭）。
3、將酶標(biāo)板置于37℃溫育30分鐘；
4、將酶標(biāo)板板取出，將其中的液體甩去，每個(gè)孔中全部加滿(mǎn)應(yīng)用洗滌液后，立即甩去液體;
5、每個(gè)孔中加滿(mǎn)應(yīng)用洗滌液后，輕微振搖酶標(biāo)板30秒后將孔中的應(yīng)用洗滌液甩去，在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。
6、重復(fù)第5個(gè)步驟5次，在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。
7、在標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔中加入100μl的酶標(biāo)偶合溶液。
8、將96孔板置于37℃溫育30分鐘。
9、將酶標(biāo)板取出，將其中的液體甩去，每個(gè)孔中全部加滿(mǎn)應(yīng)用洗滌液后，立即甩去液體。
10、每個(gè)孔中再次加滿(mǎn)洗滌應(yīng)用液后，室溫輕微振搖酶標(biāo)板30秒后將孔中的應(yīng)用洗滌液甩去，在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。
11、重復(fù)第5個(gè)步驟5次，在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。
12、在每個(gè)孔中加入底物A 50μl后立即加入底物B 50μl。輕輕振蕩混勻。（A液、B液采用不同的吸頭加樣）
13、將酶標(biāo)板置于37℃避光溫育反應(yīng)15分鐘。
14、每個(gè)微孔中加入50μl的終止液，輕輕振蕩混勻。
15、在酶標(biāo)儀上，450nm處測(cè)定OD; 顯色后，15分鐘內(nèi)進(jìn)行測(cè)定。
16、根據(jù)制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算樣本含量

人p38絲裂原活化蛋白激酶

五、結(jié) 果 判 斷
　1. 儀器值：于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值；
　2、檢測(cè)值范圍：0 – 160umol/L
　3、敏感度：1.0umol/L

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Ficol 400 聚蔗糖400 [26873-85-8] 100g
Ficol 70 聚蔗糖70 [26873-85-8] 25g
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4-Fluorobenzaldehyde 4-氟苯甲醛 [459-57-4] 250g
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4-Fluorobenzoic acid 4-氟苯甲酸 [456-22-4] 250g
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1-Fluoronaphthalene 1-氟萘 [321-38-0] 100g
5-Fluoroorotic acid 5-氟乳清酸 [703-95-7] 1g
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