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上海酶聯(lián)生物研究所


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技術文章

免費代測人心臟型脂肪酸結合蛋白

閱讀:535發(fā)布時間:2012-9-7

  人心臟型脂肪酸結合蛋白

本試劑盒僅供研究使用      標本:血清或者血漿

二、注意事項
1.  此試劑為體外檢測試劑,效期內使用,試劑應視為傳染物,不同總批號的試劑不能混用。
使用前應將盒內各試劑取出。室溫放置至少30分鐘,
濃縮洗滌液出現(xiàn)結晶后,請于37℃孵育15分鐘。
濃縮樣品稀釋液出現(xiàn)結晶后,請于37℃孵育15分鐘
若24小時內進行實驗,標本可存放于2~8℃。不需及時實驗,標本-20℃保存,避免反復凍融。
在反復清洗微孔板,并扣干微孔中的殘余液體,否則將降低度,造成吸光度偏離的假像。
加樣完畢后,應注意輕微搖動微孔反應條,以便使孔中的液體充分混勻。
試劑盒保存于2~8℃,請勿冷凍,有效期請見盒內標示。

 人心臟型脂肪酸結合蛋白

三、實驗前準備
1.使用前應將盒內各試劑取出,室溫放置至少30分鐘。
2.準備各種實驗儀器及材料,如微量移液器,吸頭,醫(yī)用蒸餾水等
3.濃縮洗液與醫(yī)用蒸餾水1︰19倍稀釋后成為應用洗滌液
4.濃縮樣品稀釋液與醫(yī)用蒸餾水1︰4倍稀釋成應用樣品稀釋液
5.用應用樣品稀釋液來稀釋樣品,按照1:100的體積比來稀釋樣品如10μl的樣品加入到1ml的應用樣品稀釋液中,充分混勻待用。)

 人心臟型脂肪酸結合蛋白

四、操 作 步 驟
1.取出酶標板,設空白孔,依照次序對應分別加入100μl的標準品于空白微孔中(空白孔視為0號標準品,用醫(yī)用蒸餾水替代)
2、分別標記樣品編號,加入100μl的稀釋樣品于空白微孔中(不同的樣本采用不同的吸頭)。
3、將酶標板置于37℃溫育30分鐘;
4、將酶標板板取出,將其中的液體甩去,每個孔中全部加滿應用洗滌液后,立即甩去液體;
5、每個孔中加滿應用洗滌液后,輕微振搖酶標板30秒后將孔中的應用洗滌液甩去,在吸水紙上將酶標板拍干。
6、重復第5個步驟5次,在吸水紙上將酶標板拍干。
7、在標準品孔和樣品孔中加入100μl的酶標偶合溶液。
8、將96孔板置于37℃溫育30分鐘。
9、將酶標板取出,將其中的液體甩去,每個孔中全部加滿應用洗滌液后,立即甩去液體。
10、每個孔中再次加滿洗滌應用液后,室溫輕微振搖酶標板30秒后將孔中的應用洗滌液甩去,在吸水紙上將酶標板拍干。
11、重復第5個步驟5次,在吸水紙上將酶標板拍干。
12、在每個孔中加入底物A 50μl后立即加入底物B 50μl。輕輕振蕩混勻。(A液、B液采用不同的吸頭加樣)
13、將酶標板置于37℃避光溫育反應15分鐘。
14、每個微孔中加入50μl的終止液,輕輕振蕩混勻。
15、在酶標儀上,450nm處測定OD; 顯色后,15分鐘內進行測定。
16、根據(jù)制備的標準曲線,計算樣本含量

 人心臟型脂肪酸結合蛋白

五、結 果 判 斷
 1. 儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值;
 2、檢測值范圍:0-80ng/ml
 3、敏感度:0.5ng/ml
Donkey rabbit/FITC 熒光素標記驢抗兔IgG 0.3ml
Donkey Goat IgG/FITC  熒光素標記驢抗羊IgG 0.3ml
PP2Ac 磷酸酯酶-2Ac抗體 0.1ml
PP2Ac 磷酸酯酶-2Ac抗體 0.2ml
PPAR-delta (peroxisome proliferator-activated receptor;PPAR-beta) D型-過氧化酶活化增生受體抗體 0.2ml
PPARγ (peroxisome proliferator-activated receptor-gamma) 過氧化酶活化增生受體γ抗體 0.1ml
PKB/Akt1 蛋白激酶B(兔來源抗體) 0.2ml
phospho-PKB(pSer473)(p-AKT PKB) 抗磷酸化蛋白激酶B抗體(*磷酸化位點:473) 0.1ml
rec Protein G/FITC 熒光素標記重組純化蛋白G 0.3ml
rec Protein A/FITC 熒光素標記重組純化蛋白A 0.3ml
Bovine IgG/FITC 熒光素標記牛IgG 0.3ml
Insulin Protein/FITC 熒光素標記豬胰島素蛋白 0.5ml
Bovine IgM/FITC 熒光素標記牛IgM 0.3ml
phospho-PKB(pSer473)(p-AKT PKB) 抗磷酸化蛋白激酶B抗體(*磷酸化位點:473) 0.2ml
PKN2 (protein kinase N2) 蛋白激酶N2抗體 0.1ml
PKN2 (protein kinase N2) 蛋白激酶N2抗體 0.2ml
RKIP(Raf kinase inhibitor protein) Raf激酶抑制蛋白抗體 0.1ml
RKIP(Raf kinase inhibitor protein) Raf激酶抑制蛋白抗體 0.2ml
PKR(double-stranded RNA-dependent Protein Kinase) 蛋白激酶R/雙鏈RNA依賴蛋白激酶抗體 0.1ml
Chicken IgM/FITC 熒光素標記雞IgM 0.3ml
dog IgG/FITC 熒光素標記狗IgG 0.3ml
dog IgM/FITC 熒光素標記狗IgM 0.3ml
Goat IgG/FITC 熒光素FITC標記羊IgG(細胞流式同型對照) 0.3ml
Goat IgM/FITC  熒光素標記羊IgM 0.3ml
PKR(double-stranded RNA-dependent Protein Kinase) 蛋白激酶R/雙鏈RNA依賴蛋白激酶抗體 0.2ml
AKT2 蛋白激酶B2 0.1ml
AKT2 蛋白激酶B2 0.2ml
 


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