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上海酶聯(lián)生物研究所


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技術(shù)文章

ELISA技術(shù)的發(fā)展趨勢

閱讀：1406發(fā)布時間：2010-3-30

1  ELISA技術(shù)的發(fā)展趨勢
    酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）在醫(yī)院實(shí)驗室中應(yīng)用之廣泛是其它試驗*的。它是一項基本的，常規(guī)的，也是一項成熟的檢測技術(shù)。90年代以來，隨意免疫熒光法，化學(xué)發(fā)光法，電化學(xué)發(fā)光法的等應(yīng)用，特別是以PCR（聚合酶鏈反應(yīng)）技術(shù)為代表的分子生物學(xué)水平技術(shù)的應(yīng)用，人們紛紛預(yù)測；ELISA技術(shù)將被更高，更靈敏的試驗方法所取代。但是由于免疫標(biāo)志物（抗原/抗體）具有無法替代的臨床意義，以及ELISA技術(shù)具有操作簡便，技術(shù)可靠，試劑方便易得等優(yōu)點(diǎn)，特別是90年代以來ELISA技術(shù)的靈敏度和特異性都得到了顯著的提高與完善。由此，ELISA技術(shù)得到了人們的認(rèn)可，成為傳染病學(xué)（肝炎，HIV，TORCH等），腫瘤標(biāo)志物以及內(nèi)分泌等各種臨床免疫指標(biāo)檢測的不可替代的主導(dǎo)技術(shù)。
    2  ELISA全過程自動化的意義
    隨著實(shí)驗室從化驗 檢驗 醫(yī)學(xué)檢驗 檢驗醫(yī)學(xué)的發(fā)展，酶免檢驗已成為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中一門重要的學(xué)科，參與臨床診斷，治療及療效判斷等工作。*，ELISA過程具有反應(yīng)時間長而要求嚴(yán)格，步驟多而復(fù)雜。因此，就一項具體的酶免試驗而言其試驗過程與完成時間是不可改變和縮短的。但對于多項目的批量標(biāo)本處理時，總體的試驗時間將大大縮短。據(jù)報道（美國臨床病理學(xué)院的調(diào)查報告），實(shí)驗室誤差產(chǎn)生原因79%的因素是因為實(shí)驗過程中標(biāo)本處理不當(dāng)以及人的為的因素而造成的。所以酶免試驗全過程的意義不僅僅在于降低了實(shí)驗者的勞動強(qiáng)度使人們從“機(jī)械”的實(shí)驗中解放出來，而且根據(jù)已發(fā)表的文獻(xiàn)研究報告：全自動酶免分析系統(tǒng)可以普遍地，顯著地提高酶免實(shí)驗的特異性及試劑的靈敏度，降低了人為因素造成的誤差。為了提高實(shí)驗室檢驗質(zhì)量，更好的為病人服務(wù)，承擔(dān)更多的檢驗項目更復(fù)雜的標(biāo)本來源與實(shí)時工作模式，酶免實(shí)驗室的自動化與標(biāo)準(zhǔn)化已成為全面實(shí)驗室自動化發(fā)展的需求，同時也給實(shí)驗室?guī)砹诵碌膬?yōu)勢和利益。
    3  全自動酶免分析儀（ALISEI）的應(yīng)用評價
    3.1 靈敏度的試驗評價系列濃度HbsAg定值血清，其測定值如下
 

濃度（ng/ml）

0.125

0.25

0.50

1.00

2.00

吸光度（S）

0.078

0.093

0.200

0.351

0.747

S/CO

0.52

0.88

1.90

3.34

7.11

    CO=0.05×2.1=0.105.既當(dāng)S/CO>=1時為陽性。結(jié)果表明：全自動酶免分析儀具有較高的檢測靈敏度。當(dāng)HbsAg的濃度在0.5ng/ml時即可檢出。
    3.2  重復(fù)性的試驗評價取混合HBsAg定值血清和HbsAg陽性患者血清作20次連續(xù)檢測，其結(jié)果如

 

NO　   1    2    3   4      5     6    7      8   9     10　

定值血清 0.490 0.530 0.491 0.509 0.459 0.537 0.490 0.484 0.475 0.486

陽性血清 2.595 3.065 2.965 2.891 2.888 2.864 2.865 2.915 3.080 2.923

  NO    11    12   13   14   15    16   17     18   19   20

定值血清 0.477 0.484 0.492 0.553 0.463 0.486 0.517 0.494 0.488 0.476

陽性血清 2.984 2.875 3.012 2.878 2.932 3.020 2.884 2.860 2.879 2.967

定值血清：   X=0.493       SD=0.022    CV=1.085%

陽性血清：   X=2.94        SD=0.068    CV=1.999%

 

結(jié)果表明：全自動酶免分析儀具有良好的重復(fù)性，符產(chǎn)品的要求（CV<3%）。
    3.3  討論
    ELISA試驗受諸多因素影響。其中試劑盒的質(zhì)量以及操作者的水平將直接影響到這一過程的成功與否。因此在*按照試劑盒要求的前提下，均一，穩(wěn)定的操作過程和試驗條件是獲得*試驗結(jié)果的必要條件。而全自動酶免分析儀避免了常規(guī)程序的局限性，集加樣，孵育，洗板，比色于一體。極大的消除了人為因素帶來的誤差，使試驗的靈敏性，重復(fù)性以及特異性同時有所提高。所以，全自動酶免分析儀符合現(xiàn)代化實(shí)驗室的要求，也是現(xiàn)代化醫(yī)院實(shí)驗室的發(fā)展趨勢。
 


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