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葡聚糖凝膠
點擊次數(shù)：1822 發(fā)布時間：2010-12-29
葡聚糖凝膠定義：葡聚糖凝膠是指由天然高分子－葡聚糖與其它交聯(lián)劑交聯(lián)而成的凝膠。葡聚糖凝膠主要由Pharmacia Biotech 生產。常見的有兩大類，商品名分別為Sephadex 和Sephacryl。
中zui常見的是Sephadex 系列，它是葡聚糖與3－氯－1，2環(huán)氧丙烷（交聯(lián)劑）相互交聯(lián)而成，交聯(lián)度由環(huán)氧氯丙烷的百分比控制。Sephadex 的主要型號是G-10 ~ G-200，后面的數(shù)字是凝膠的吸水率（單位是mL / g 干膠）乘以10。如Sephadex G-50，表示吸水率是5mL/g 干膠。Sephadex 的親水性很好，在水中極易膨脹，不同型號的Sephadex 的吸水率不同，它們的孔穴大小和分離范圍也不同。數(shù)字越大的，排阻極限越大，分離范圍也越大。Sephadex 中排阻極限zui大的G-200為8×10。
Sephadex G-25和G-50中分別加入羥丙基基團反應，形成LH 型烷基化，主要型號為Sephadex LH-20和LH-60，適用于以有機溶劑為流動相，分離脂溶性物質，例如*、脂肪酸激素等。Sephacryl 是葡聚糖與甲叉雙丙烯酰胺（N，N'-methylenebisacrylamide）交聯(lián)而成。是一種比較新型的。Sephacryl 的優(yōu)點就是它的分離范圍很大，排阻極限甚至可以達到108，遠遠大于Sephadex 的范圍。所以它不僅可以用于分離一般蛋白，也可以用于分離蛋白多糖、質粒、甚至較大的病毒顆粒。Sephadex 在水溶液、鹽溶液、堿溶液、弱酸溶液以及有機溶液中都是比較穩(wěn)定的，可以多次重復使用。Sephadex 穩(wěn)定工作的pH 一般為為2~10。強酸溶液和氧化劑會使交聯(lián)的糖苷鍵水解斷裂，所以要避免Sephadex 與強酸和氧化劑接觸。
Sephadex 在高溫下穩(wěn)定，可以煮沸消毒，在100 °C 下40 min 對凝膠的結構和性能都沒有明顯的影響。Sephadex 由于含有羥基基團，故呈弱酸性，這使得它有可能與分離物中的一些帶電基團（尤其是堿性蛋白）發(fā)生吸附作用。但一般在離子強度大于0.05的條件下，幾乎沒有吸附作用。所以在用Sephadex 進行凝膠層析實驗時常使用一定濃度的鹽溶液作為洗脫液，這樣就可以避免Sephadex 與蛋白發(fā)生吸附，但應注意如果鹽濃度過高，會引起凝膠柱床體積發(fā)生較大的變化。Sephadex 有各種顆粒大?。ㄒ话阌写?、中、細、超細）可以選擇，一般粗顆粒流速快，但分辨率較差；細顆粒流速慢，但分辨率高。要根據(jù)分離要求來選擇顆粒大小。Sephadex 的機械穩(wěn)定性相對較差，它不耐壓，分辨率高的細顆粒要求流速較慢，所以不能實現(xiàn)快速而的分離。
所以中的Sephacryl 不僅可以用于分離一般蛋白，也可以用于分離蛋白多糖、質粒、甚至較大的病毒顆粒。 Sephacryl 與Sephadex 相比另一個優(yōu)點就是它的化學和機械穩(wěn)定性更高：Sephacryl 在各種溶劑中很少發(fā)生溶解或降解，可以用各種去污劑、胍、脲等作為洗脫液，耐高溫，Sephacryl 穩(wěn)定工作的pH 一般為3~11。另外Sephacryl 的機械性能較好，可以以較高的流速洗脫，比較耐壓，分辨率也較高，所以Sephacryl 相比Sephadex 可以實現(xiàn)相對比較快速而且較高分辨率的分離。