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人單純皰疹病毒Ⅰ型抗體(HSVⅠ-Ab)ELISA試劑盒操作說(shuō)明
最近更新時(shí)間:2011-12-8
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人單純皰疹病毒Ⅰ型抗體(HSVⅠ-Ab)ELISA試劑盒組成:
30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶
酶標(biāo)試劑 6ml×1瓶
酶標(biāo)包被板 12孔×8條
樣品稀釋液 6ml×1瓶
顯色劑A液 6ml×1瓶
顯色劑B液 6ml×1/瓶
終止液 6ml×1瓶
陽(yáng)性對(duì)照 0.5ml×1瓶
陰性對(duì)照 0.5ml×1瓶
說(shuō)明書(shū) 1份
封板膜 2張
密封袋 1個(gè)
人單純皰疹病毒Ⅰ型抗體(HSVⅠ-Ab)ELISA試劑盒操作步驟:
1. 編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
2. 加樣:分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
人單純皰疹病毒Ⅰ型抗體(HSVⅠ-Ab)ELISA試劑盒計(jì)算和結(jié)果判定:
試驗(yàn)有效性:陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10
臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為人單純皰疹病毒Ⅰ型抗體(HSVⅠ-Ab)陰性
陽(yáng)性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為人單純皰疹病毒Ⅰ型抗體(HSVⅠ-Ab)陽(yáng)性