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人單純皰疹病毒Ⅰ型抗體（HSVⅠ-Ab）ELISA試劑盒操作說(shuō)明
最近更新時(shí)間：2011-12-8
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人單純皰疹病毒Ⅰ型抗體（HSVⅠ-Ab）ELISA試劑盒組成：
30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶
酶標(biāo)試劑 6ml×1瓶
酶標(biāo)包被板 12孔×8條
樣品稀釋液 6ml×1瓶
顯色劑A液 6ml×1瓶
顯色劑B液 6ml×1/瓶
終止液 6ml×1瓶
陽(yáng)性對(duì)照 0.5ml×1瓶
陰性對(duì)照 0.5ml×1瓶
說(shuō)明書 1份
封板膜 2張
密封袋 1個(gè)
人單純皰疹病毒Ⅰ型抗體（HSVⅠ-Ab）ELISA試劑盒操作步驟：
1. 編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）
2. 加樣：分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
人單純皰疹病毒Ⅰ型抗體（HSVⅠ-Ab）ELISA試劑盒計(jì)算和結(jié)果判定：
試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10
臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為人單純皰疹病毒Ⅰ型抗體（HSVⅠ-Ab）陰性
陽(yáng)性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為人單純皰疹病毒Ⅰ型抗體（HSVⅠ-Ab）陽(yáng)性