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小鼠Ⅳ型膠原試劑盒說明書

最近更新時間:2011-12-8

提 供 商:上??婆d商貿(mào)有限公司資料大?。?/span>14.8KB

文件類型:JPG 圖片下載次數(shù):49次

資料類型:瀏覽次數(shù):234次

詳細介紹:
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名稱:小鼠Ⅳ型膠原試劑盒

本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷

檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)
先包被I型膠原(Col I)抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、
HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB
在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的
黃色。顏色的深淺和樣品中的I型膠原(Col I)呈正相關(guān)。用酶標儀
在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞
刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地
分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘
取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于
-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品
1. 酶標儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱

操作注意事項
1. 試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20 分鐘。從冰箱取出的
濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正?,F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶*溶解
后再使用。
2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
3. 濃度為0 的S0 號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5 倍,zui終結(jié)果乘以5 才是樣本實際濃度。
4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻。
 

試劑盒組成
名稱96孔配置48孔配置備注
微孔酶標板12 孔×8 條12 孔×4 條無
標準品0.3mL*6 管0.3mL*6 管無
*6mL 3mL 無
檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無
20×洗滌緩沖液25mL 15mL 按說明書進行稀釋
底物A 6mL 3mL 無
底物B 6mL 3mL 無
終止液6mL 3mL 無
封板膜2 張2 張無
說明書1 份1 份無
自封袋1 個1 個無
注:標準品(S0-S5)濃度依次為:0、2、4、8、16、32 ng/mL
試劑的準備
20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20 稀釋,即1 份的20×洗滌緩
沖液加19 份的蒸餾水。

洗板方法
1. 手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min 后甩盡
孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5 次。
2. 自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5 次。

操作步驟
1. 從室溫平衡20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封
袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3. 樣本孔先加待測樣本10μL,再加*40μL;空白孔不
加。
4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶
(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴
鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去
洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5 次(也可用洗板機洗板)。
6. 每孔加入底物A、B 各50μL,37℃避光孵育15min。7. 每孔加入終止液50μL,15min 內(nèi),在450nm 波長處測定各孔的
OD 值。
結(jié)果判斷
繪制標準曲線:在Excel 工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應(yīng)
OD 值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣
本濃度值。

試劑盒性能
1. 準確性:標準品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R 值,大于等于
0.9900。
2. 靈敏度:zui低檢測濃度小于0.1 ng/mL。
3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
5. 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
6. 有效期:6 個月
 

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