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技術(shù)文章

堿性磷酸酶用于ELISA的標(biāo)記用酶

閱讀：484發(fā)布時間：2011-11-2

堿性磷酸酶為二聚體蛋白，是一種含鋅的金屬酶，每分子酶至少含2個Zn原子。酶上3類金屬結(jié)合位點，即所謂的催化（A）、結(jié)構(gòu)（B）和調(diào)節(jié)（C）位點，兩個A位點的結(jié)合則只會導(dǎo)致一個亞單位的磷酸化，即負(fù)協(xié)作亞單位相互作用（negativecooperativesubunitinteraction），而當(dāng)加入金屬離子（例如Mg2+）結(jié)合B和C位點時，上述負(fù)協(xié)作亞單位相互作用即隨之消除，2個亞單位都被磷酸化。每個亞單位Znz+結(jié)合于3個不同的*殘基，其中至少1個位于A位點。

堿性磷酸酶用于ELISA必須注意的是含磷酸鹽的緩沖液對其酶活性的抑制作用，因為在ELISA中所使用的溫育和洗滌緩沖液一般均為磷酸鹽緩沖液生理鹽水（PBS），含有相對高濃度的磷離子（15retool／L），對堿性磷酸酶有很強的抑制作用，盡管zui后顯色反應(yīng)的底物在另一種緩沖液中，但前面PBS洗板所殘留的PBS，足以抑制約一半的酶活性。因此如試劑盒標(biāo)記用酶為堿性磷酸酶，則溫育和洗滌緩沖液不能使用PBS溶液。


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