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中性粒細(xì)胞趨化試驗(yàn)檢測IL-8

閱讀：678發(fā)布時(shí)間：2012-5-12

ID8是中性粒細(xì)胞的激活劑和趨化因子；本法通過檢測中性粒細(xì)胞的遷移距離來反映IL-8活性。
（1）配制2倍濃度的DMEM培養(yǎng)液100mL，其中含20mL的FCS，75mgNaHC03，置48C水浴預(yù)溫。
（2）配制2％瓊脂糖，水浴中保溫48℃左右時(shí)，與上述2XDMEM等量混勻。
（3）制片（3mlJ片），室溫凝固后，放4~C 30～60min進(jìn)一步凝固，打孔。
（4）分離人外周血中性粒細(xì)胞，用DMEM調(diào)整細(xì)胞濃度為2．5×105／mL，取lOgL細(xì)胞懸液加人各組中心孔，上孔分別加10／uL含趨化因子的待檢樣品及rlL-8或其他陽性對照趨化因子，下孔加lOgLDMEM作陰性對照。
（5）將玻片放濕盒中，37~C溫育2h后，甲醇固定30min，瑞氏染液染片并干燥。
（6）顯微鏡下分別測量細(xì)胞從中心孑L邊緣朝向樣品孔游走的距離（趨化游走距離）及朝向陰性對照孔的游走距離（自發(fā)游走距離），趨化活性以趨化指數(shù)表示。
為證實(shí)樣品中趨化效應(yīng)是IL-8特異的，還需將抗IL-8中和抗體先與待測樣品混合，孵育1h后，加入玻片孔中，觀察趨化反應(yīng)。亦可用其他相關(guān)抗體阻斷試驗(yàn)區(qū)別IL-8及其他趨化因子的作用。


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