冰凍干燥技術(shù)

冰凍干燥就是使蛋白樣品液在預(yù)先冰凍的狀態(tài)下，用抽真空的方法，不經(jīng)液態(tài)，直接升華，除去其中所含水分，并使樣品蛋白成為干燥制劑的過程。在免疫酶技術(shù)中，所用的血清、酶等在溶液中容易變性*，制成干燥制劑后可長時(shí)間地在室溫或冰箱（4℃）內(nèi)保存而不失活，并且便于攜帶。

之所以要在冰凍是因?yàn)楸桓稍飿悠匪只蛉軇┯捎谥車諝鈮毫Φ臏p少而增加蒸發(fā)速度，并且真空度愈高，溶液沸點(diǎn)越低，蒸發(fā)越快。

冰凍真空干燥與真空干燥和噴霧干燥相比，在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用得更多更普遍。

• 冰凍干燥血清的程序

• 先將適量血清傾倒在適當(dāng)大小的培養(yǎng)皿中（樣品液厚度在1cm以下），在低溫—20℃以下）下冰凍成固態(tài)。
• 在冰凍干燥裝置中，分別放置固體氫氧化鈉和五氧化二磷，真空干燥器上端抽氣管通過五氧化二磷干燥管與真空泵相連。
• 將冰凍血清塊連同培養(yǎng)皿放進(jìn)真空干燥器內(nèi)，立即封閉干燥器（事先在蓋沿涂上凡士林），開動(dòng)油泵，一般經(jīng)5－10h后，即可得冰凍干燥制劑。
• 冰凍干燥完畢。首先逐漸打開干燥器頂蓋玻璃閥，慢慢放氣，待整個(gè)系統(tǒng)中壓力上升到大氣壓后，取下樣品干燥容器，zui后關(guān)閉真空油泵。

 2.討論

（1）冰凍干燥的效果，取決于真空泵的真空度與口徑合適的管道。真空油泵選用抽空容量大的，所有接管應(yīng)力求粗短。

    （2）樣品如果是溶液，則是水溶液，以避免有機(jī)溶劑降低冰點(diǎn)，進(jìn)入泵內(nèi)。濃度要適中，不低于1.5%。

1. 樣品如用緩沖液作為溶劑，用有揮發(fā)性的，例如碳酸鹽或醋酸鹽緩沖液;若是非揮發(fā)性的，則要考慮pH和鹽濃度對樣品的影響。例如用pH7.0磷酸鹽緩沖液，由于冰凍干燥時(shí)Na2鹽比Na鹽先結(jié)晶，pH降至約3.5，對樣品有害。在樣品液中加入少量的明膠、乳糖或葡萄糖等，有利于保存活性。
2. 樣品預(yù)凍時(shí)先放在普通冰箱冷至0℃后，迅速移入一20℃以下的冰箱驟冷凍結(jié)。
3. 在抽真空時(shí)，樣品萬一融化，必須重新預(yù)凍，并要檢查原因。
4. 抽真空約30min，如盛有預(yù)凍樣品的容器結(jié)霜，表明運(yùn)轉(zhuǎn)良好。由于樣品中水分的升華，溫度降低，樣品自然處于冰凍狀態(tài)，不必在干燥器外邊采取冷卻措施。
5. 干燥制劑裝于小瓶，用蠟封口，貯于普通冰箱。

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