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產(chǎn)品型號(hào)XB1523
品 牌
廠商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地上海市
更新時(shí)間:2018-09-12 09:45:13瀏覽次數(shù):474次
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PC 61 5.3 [PC 61; PC 61.5.3]雜交瘤細(xì)胞CD
人乳腺癌細(xì)胞
ZR-75-1
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實(shí)驗(yàn)步驟
1.人無(wú)菌室之前用肥皂洗手,用75%酒精擦拭消毒雙手。
2.倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),確定細(xì)胞是否需要傳代及細(xì)胞需要稀釋的倍數(shù)。將培養(yǎng)用液置37℃下預(yù)熱。
3.超凈臺(tái)臺(tái)面應(yīng)整潔,用0.1%新潔爾滅溶液擦凈。
4.打開(kāi)超凈臺(tái)的紫外燈照射臺(tái)面20min左右,關(guān)閉超凈臺(tái)的紫外燈,打開(kāi)抽風(fēng)機(jī)清潔空氣,除去臭氧。
5.點(diǎn)燃酒精燈;取出無(wú)菌試管,巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮頭;過(guò)酒精燈火焰略燒后插在無(wú)菌試管內(nèi)。
6.將培養(yǎng)用液瓶口用75%酒精消毒,過(guò)酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上。
7.倒掉培養(yǎng)細(xì)胞的舊培養(yǎng)基。酌情可用2—3mLHanks液洗去殘留的舊培養(yǎng)基,或用少量胰酶涮洗一下。
8.每個(gè)大培養(yǎng)瓶加入1mL胰酶,小瓶用量酌減,蓋好瓶蓋后在倒置顯微鏡下觀察,當(dāng)細(xì)胞收回突起變圓時(shí)立即翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶,使細(xì)胞脫離胰酶,然后將胰酶倒掉。注意勿使細(xì)胞提早脫落入消化液中。
9.加入少量的含血清的新鮮培養(yǎng)基,反復(fù)吹打消化好的細(xì)胞使其脫壁并分散,再根據(jù)分傳瓶數(shù)補(bǔ)加一定量的含血清的新鮮培養(yǎng)基(7~10mL/大瓶,3~5mL/小瓶)制成細(xì)胞懸液,然后分裝到新培養(yǎng)瓶中。蓋上瓶蓋,適度擰緊后再稍回轉(zhuǎn),以利于CO2氣體的進(jìn)入,將培養(yǎng)瓶放回CO2培養(yǎng)箱。
10.對(duì)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞,步驟7-9不做??蓪⒓?xì)胞懸液進(jìn)行離心去除舊培養(yǎng)基上清,加入新鮮培養(yǎng)基,然后分裝到各瓶中。
原代細(xì)胞(primary culture cell)是指從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。有人把培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以?xún)?nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱(chēng)為原代細(xì)胞培養(yǎng)。
原代細(xì)胞(primary cell) 動(dòng)物組織經(jīng)胰蛋白酶等消化,分散,獲得單個(gè)細(xì)胞,再生長(zhǎng)于培養(yǎng)皿中。大多數(shù)組織可以制備原代細(xì)胞,但生長(zhǎng)的快慢及難易程度不一。腎和睪丸zui常用,甲狀腺細(xì)胞生長(zhǎng)較慢,只用于某些特定的病毒如豬傳染性腸胃炎病毒的培養(yǎng)。
實(shí)驗(yàn)步驟
1.人無(wú)菌室之前用肥皂洗手,用75%酒精擦拭消毒雙手。
2.倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),確定細(xì)胞是否需要傳代及細(xì)胞需要稀釋的倍數(shù)。將培養(yǎng)用液置37℃下預(yù)熱。
3.超凈臺(tái)臺(tái)面應(yīng)整潔,用0.1%新潔爾滅溶液擦凈。
4.打開(kāi)超凈臺(tái)的紫外燈照射臺(tái)面20min左右,關(guān)閉超凈臺(tái)的紫外燈,打開(kāi)抽風(fēng)機(jī)清潔空氣,除去臭氧。
5.點(diǎn)燃酒精燈;取出無(wú)菌試管,巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮頭;過(guò)酒精燈火焰略燒后插在無(wú)菌試管內(nèi)。
6.將培養(yǎng)用液瓶口用75%酒精消毒,過(guò)酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上。
7.倒掉培養(yǎng)細(xì)胞的舊培養(yǎng)基。酌情可用2—3mLHanks液洗去殘留的舊培養(yǎng)基,或用少量胰酶涮洗一下。
8.每個(gè)大培養(yǎng)瓶加入1mL胰酶,小瓶用量酌減,蓋好瓶蓋后在倒置顯微鏡下觀察,當(dāng)細(xì)胞收回突起變圓時(shí)立即翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶,使細(xì)胞脫離胰酶,然后將胰酶倒掉。注意勿使細(xì)胞提早脫落入消化液中。
9.加入少量的含血清的新鮮培養(yǎng)基,反復(fù)吹打消化好的細(xì)胞使其脫壁并分散,再根據(jù)分傳瓶數(shù)補(bǔ)加一定量的含血清的新鮮培養(yǎng)基(7~10mL/大瓶,3~5mL/小瓶)制成細(xì)胞懸液,然后分裝到新培養(yǎng)瓶中。蓋上瓶蓋,適度擰緊后再稍回轉(zhuǎn),以利于CO2氣體的進(jìn)入,將培養(yǎng)瓶放回CO2培養(yǎng)箱。
10.對(duì)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞,步驟7-9不做??蓪⒓?xì)胞懸液進(jìn)行離心去除舊培養(yǎng)基上清,加入新鮮培養(yǎng)基,然后分裝到各瓶中。
原代細(xì)胞(primary culture cell)是指從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。有人把培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以?xún)?nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱(chēng)為原代細(xì)胞培養(yǎng)。
原代細(xì)胞(primary cell) 動(dòng)物組織經(jīng)胰蛋白酶等消化,分散,獲得單個(gè)細(xì)胞,再生長(zhǎng)于培養(yǎng)皿中。大多數(shù)組織可以制備原代細(xì)胞,但生長(zhǎng)的快慢及難易程度不一。腎和睪丸zui常用,甲狀腺細(xì)胞生長(zhǎng)較慢,只用于某些特定的病毒如豬傳染性腸胃炎病毒的培養(yǎng)。
細(xì)胞核:
細(xì)胞質(zhì)里含有一個(gè)近似球形的細(xì)胞核(nucleolus),是由更加黏稠的物質(zhì)構(gòu)成的。細(xì)胞核通常位于細(xì)胞的中央,成熟的植物細(xì)胞的細(xì)胞核,往往被中央液泡推擠到細(xì)胞的邊緣。細(xì)胞核中有一種物質(zhì),易被洋紅、蘇木精、甲基綠等堿性染料染成深色,叫做染色質(zhì)(chromatin)。生物體用于傳種接代的物質(zhì)即遺傳物質(zhì),就在染色質(zhì)上。當(dāng)細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂時(shí),染色質(zhì)就變化成染色體。
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