人乳腺癌細(xì)胞

ZR-75-1

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相關(guān)知識(shí)>>>>

　　實(shí)驗(yàn)步驟
　　1．人無(wú)菌室之前用肥皂洗手，用75％酒精擦拭消毒雙手。
　　2．倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，確定細(xì)胞是否需要傳代及細(xì)胞需要稀釋的倍數(shù)。將培養(yǎng)用液置37℃下預(yù)熱。
　　3．超凈臺(tái)臺(tái)面應(yīng)整潔，用0.1％新潔爾滅溶液擦凈。
　　4．打開(kāi)超凈臺(tái)的紫外燈照射臺(tái)面20min左右，關(guān)閉超凈臺(tái)的紫外燈，打開(kāi)抽風(fēng)機(jī)清潔空氣，除去臭氧。
　　5．點(diǎn)燃酒精燈；取出無(wú)菌試管，巴士德吸管和刻度吸管；安上橡皮頭；過(guò)酒精燈火焰略燒后插在無(wú)菌試管內(nèi)。
　　6．將培養(yǎng)用液瓶口用75％酒精消毒，過(guò)酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上。
　　7．倒掉培養(yǎng)細(xì)胞的舊培養(yǎng)基。酌情可用2—3mLHanks液洗去殘留的舊培養(yǎng)基，或用少量胰酶涮洗一下。
　　8．每個(gè)大培養(yǎng)瓶加入1mL胰酶，小瓶用量酌減，蓋好瓶蓋后在倒置顯微鏡下觀察，當(dāng)細(xì)胞收回突起變圓時(shí)立即翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞脫離胰酶，然后將胰酶倒掉。注意勿使細(xì)胞提早脫落入消化液中。
　　9．加入少量的含血清的新鮮培養(yǎng)基，反復(fù)吹打消化好的細(xì)胞使其脫壁并分散，再根據(jù)分傳瓶數(shù)補(bǔ)加一定量的含血清的新鮮培養(yǎng)基（7～10mL／大瓶，3～5mL／小瓶）制成細(xì)胞懸液，然后分裝到新培養(yǎng)瓶中。蓋上瓶蓋，適度擰緊后再稍回轉(zhuǎn)，以利于CO2氣體的進(jìn)入，將培養(yǎng)瓶放回CO2培養(yǎng)箱。
　　10．對(duì)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，步驟7-9不做?？蓪⒓?xì)胞懸液進(jìn)行離心去除舊培養(yǎng)基上清，加入新鮮培養(yǎng)基，然后分裝到各瓶中。
原代細(xì)胞（primary culture cell）是指從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。有人把培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以?xún)?nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱(chēng)為原代細(xì)胞培養(yǎng)。
　　原代細(xì)胞（primary cell） 動(dòng)物組織經(jīng)胰蛋白酶等消化，分散，獲得單個(gè)細(xì)胞，再生長(zhǎng)于培養(yǎng)皿中。大多數(shù)組織可以制備原代細(xì)胞，但生長(zhǎng)的快慢及難易程度不一。腎和睪丸zui常用，甲狀腺細(xì)胞生長(zhǎng)較慢，只用于某些特定的病毒如豬傳染性腸胃炎病毒的培養(yǎng)。
　　實(shí)驗(yàn)步驟
　　1．人無(wú)菌室之前用肥皂洗手，用75％酒精擦拭消毒雙手。
　　2．倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，確定細(xì)胞是否需要傳代及細(xì)胞需要稀釋的倍數(shù)。將培養(yǎng)用液置37℃下預(yù)熱。
　　3．超凈臺(tái)臺(tái)面應(yīng)整潔，用0.1％新潔爾滅溶液擦凈。
　　4．打開(kāi)超凈臺(tái)的紫外燈照射臺(tái)面20min左右，關(guān)閉超凈臺(tái)的紫外燈，打開(kāi)抽風(fēng)機(jī)清潔空氣，除去臭氧。
　　5．點(diǎn)燃酒精燈；取出無(wú)菌試管，巴士德吸管和刻度吸管；安上橡皮頭；過(guò)酒精燈火焰略燒后插在無(wú)菌試管內(nèi)。
　　6．將培養(yǎng)用液瓶口用75％酒精消毒，過(guò)酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上。
　　7．倒掉培養(yǎng)細(xì)胞的舊培養(yǎng)基。酌情可用2—3mLHanks液洗去殘留的舊培養(yǎng)基，或用少量胰酶涮洗一下。
　　8．每個(gè)大培養(yǎng)瓶加入1mL胰酶，小瓶用量酌減，蓋好瓶蓋后在倒置顯微鏡下觀察，當(dāng)細(xì)胞收回突起變圓時(shí)立即翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞脫離胰酶，然后將胰酶倒掉。注意勿使細(xì)胞提早脫落入消化液中。
　　9．加入少量的含血清的新鮮培養(yǎng)基，反復(fù)吹打消化好的細(xì)胞使其脫壁并分散，再根據(jù)分傳瓶數(shù)補(bǔ)加一定量的含血清的新鮮培養(yǎng)基（7～10mL／大瓶，3～5mL／小瓶）制成細(xì)胞懸液，然后分裝到新培養(yǎng)瓶中。蓋上瓶蓋，適度擰緊后再稍回轉(zhuǎn)，以利于CO2氣體的進(jìn)入，將培養(yǎng)瓶放回CO2培養(yǎng)箱。
　　10．對(duì)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，步驟7-9不做?？蓪⒓?xì)胞懸液進(jìn)行離心去除舊培養(yǎng)基上清，加入新鮮培養(yǎng)基，然后分裝到各瓶中。
原代細(xì)胞（primary culture cell）是指從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。有人把培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以?xún)?nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱(chēng)為原代細(xì)胞培養(yǎng)。
　　原代細(xì)胞（primary cell） 動(dòng)物組織經(jīng)胰蛋白酶等消化，分散，獲得單個(gè)細(xì)胞，再生長(zhǎng)于培養(yǎng)皿中。大多數(shù)組織可以制備原代細(xì)胞，但生長(zhǎng)的快慢及難易程度不一。腎和睪丸zui常用，甲狀腺細(xì)胞生長(zhǎng)較慢，只用于某些特定的病毒如豬傳染性腸胃炎病毒的培養(yǎng)。
細(xì)胞核:
　　細(xì)胞質(zhì)里含有一個(gè)近似球形的細(xì)胞核（nucleolus），是由更加黏稠的物質(zhì)構(gòu)成的。細(xì)胞核通常位于細(xì)胞的中央，成熟的植物細(xì)胞的細(xì)胞核，往往被中央液泡推擠到細(xì)胞的邊緣。細(xì)胞核中有一種物質(zhì)，易被洋紅、蘇木精、甲基綠等堿性染料染成深色，叫做染色質(zhì)（chromatin）。生物體用于傳種接代的物質(zhì)即遺傳物質(zhì)，就在染色質(zhì)上。當(dāng)細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂時(shí)，染色質(zhì)就變化成染色體。