（一）污染問(wèn)題
污染問(wèn)題是組織培養(yǎng)過(guò)程中常見(jiàn)的而且也必須給予高度重視的一個(gè)問(wèn)題。污染率達(dá)20％很常見(jiàn)，有時(shí)甚至高達(dá)50％。經(jīng)分析，組織中的污染來(lái)源可分成三大類(lèi)：*類(lèi)是材料帶菌，第二類(lèi)是接種污染，第三類(lèi)是培養(yǎng)過(guò)程感染。材料帶菌就是選用的外植體因過(guò)大等原因本身帶有病菌，或繼代培養(yǎng)的材料本身帶有病菌。針對(duì)這種情況，要求初代接種時(shí)使用大小適宜的外植體，在繼代的培養(yǎng)中，每次繼代之前都要對(duì)繼代的材料進(jìn)行仔細(xì)檢查，凡是污染的材料應(yīng)予以丟棄。接種污染是由于在接種過(guò)程中將病菌傳入培養(yǎng)材料而造成的。引起接種污染可能有三個(gè)原因：*是由于超凈工作臺(tái)濾出的空氣中帶菌超標(biāo)造成的，屬于這種情況要及時(shí)修理或更換超凈工作臺(tái)；第二是由于交叉污染造成的，針對(duì)這種情況，要求接種者操作細(xì)心，接種用的鑷子不要與酒精燈、臺(tái)面等接觸，一旦接觸應(yīng)立即進(jìn)行消毒處理，同時(shí)各瓶材料接完時(shí)要對(duì)鑷子進(jìn)行消毒；第三種是由接種者呼吸等原因造成的，針對(duì)這一點(diǎn)，要求接種者在接種時(shí)應(yīng)用酒精棉擦手，穿上無(wú)菌的白大衣，帶上口罩和帽子。
在材料培養(yǎng)的過(guò)程中，如果環(huán)境中病菌多、濕度大、溫度高，同樣會(huì)使培養(yǎng)的材料污染。這就要求我們要經(jīng)常進(jìn)行清潔衛(wèi)生，對(duì)培養(yǎng)空間定期進(jìn)行消毒處理，及時(shí)清除污染材料，轉(zhuǎn)移繼代材料。
有時(shí)候高壓滅菌不*，會(huì)造成嚴(yán)重污染，這點(diǎn)也很關(guān)鍵。
（二）褐變問(wèn)題
組織培養(yǎng)中的一大問(wèn)題是初代培養(yǎng)中外植體易于褐變。從我們的經(jīng)驗(yàn)和別人研究結(jié)果看可采取以下方法：①初代培養(yǎng)時(shí)，剝?nèi)〗M織塊能夠在無(wú)菌水中進(jìn)行；②初代培養(yǎng)采用液體培養(yǎng)比用固體培養(yǎng)效果好；③在培養(yǎng)基中單獨(dú)或復(fù)合使用防褐變物質(zhì)：蕓香苷50-100毫克/升、20%*溶液5毫升/升、檸檬酸0.05-0.5%、活性炭1-4克/升、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）5-10克/升；④從開(kāi)始培養(yǎng)到成活的一段時(shí)間內(nèi)保持?jǐn)z氏溫度17-20度；⑤調(diào)整好培養(yǎng)基的酸堿度，以酸堿度為5.5時(shí)成活率高；⑥6-8月份高溫季節(jié)，外植體易褐變，成活率低；⑦從新生的假球莖上取芽，不僅能夠減少污染，而且成活率高。
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