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上海川翔生物科技有限公司
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經(jīng)營(yíng)模式:經(jīng)銷(xiāo)商
商鋪產(chǎn)品:123條
所在地區(qū):上海上海
聯(lián)系人:銷(xiāo)售部
閱讀:477發(fā)布時(shí)間:2011-2-22
產(chǎn)品名稱(chēng):人促卵泡刺激激素(FSH)
酶免疫ELISA檢測(cè)試劑盒
方法:ELISA 、定量
規(guī)格:96T
一、用途
本試劑盒用于人血清中促卵泡刺激素(FSH)濃度的定量檢測(cè)。
二、概述及檢測(cè)原理
促卵泡激素(FSH)和黃體激素(LH)與性腺組織的生長(zhǎng)和生殖活動(dòng)密切相關(guān)。性腺組織中合成和分泌的雄性和雌性性激素通過(guò)負(fù)反饋控制著FSH和LH的循環(huán)水平。
FSH是垂體前葉的嗜堿細(xì)胞分泌的糖蛋白。促性腺素釋放激素(GnRH)由下丘腦產(chǎn)生,控制著垂體前葉中FSH的釋放。象其它糖蛋白如LH、TSH和HCG一樣,F(xiàn)SH是由α和β亞基組成的。這類(lèi)激素的α亞基的結(jié)構(gòu)是很相似的,因此,這些激素的生物學(xué)和免疫學(xué)特性的區(qū)別取決于其*的β亞基。
在女性體內(nèi),F(xiàn)SH通過(guò)作用于顆粒細(xì)胞上的受體,刺激著卵巢卵泡的發(fā)育和成熟,同時(shí)促進(jìn)了卵泡類(lèi)固醇和LH的生成。生成的LH結(jié)合到膜細(xì)胞上,進(jìn)一步刺激類(lèi)固醇的生成。卵巢內(nèi)的雌二醇量隨著卵泡的成熟而增加,因此,這促進(jìn)FSH受體的活性和FSH卵泡的結(jié)合能力。所以,F(xiàn)SH、LH和雌二醇在維持女性卵巢復(fù)原和成熟方面密切相關(guān)。
在絕經(jīng)或卵巢切除后,以及早熟卵巢的衰退期,F(xiàn)SH的水平升高。FSH的水平由雌激素通過(guò)負(fù)反饋進(jìn)行調(diào)控。FSH和LH,或者FSH和雌激素之間的關(guān)系一旦失衡,有可能引起神經(jīng)性厭食和多囊卵巢的疾病。當(dāng)隨機(jī)的FSH濃度超過(guò)40mIU/ml時(shí),則表明卵巢衰退,盡管也有些明顯的例外。
在男性體內(nèi),生精小管的發(fā)育和生精作用的保持都是由FSH調(diào)控的。不過(guò),雄激素并不象雌激素一樣會(huì)降低FSH水平。因此,證明負(fù)反饋關(guān)系只能通過(guò)血清LH。
不太清楚是什么原因,缺精子或少精子的男性體內(nèi)的FSH的水平經(jīng)常提升。經(jīng)放射性免疫測(cè)定,受試者的腫瘤通常會(huì)降低血清FSH濃度,但卻提高了LH的水平。會(huì)引起與受試者腫瘤分泌的類(lèi)似人絨毛膜*(hCG)物質(zhì)發(fā)生交叉反應(yīng)。
男性體內(nèi)高水平的FSH會(huì)在睪丸衰退和克蘭費(fèi)爾特氏綜合癥的初期出現(xiàn)。FSH的濃度在饑餓、腎衰竭、甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)和肝硬化時(shí)也會(huì)有所提高。
BioCheck FSH EIA檢測(cè)的原理是基于固相酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)。該檢測(cè)系統(tǒng)是利用了作為固相(微孔板)固定劑的鼠單克隆抗α-FSH抗體,以及抗體酶(辣根過(guò)氧化物酶)結(jié)合物溶液中的鼠單克隆抗β-FSH抗體。被測(cè)樣品同時(shí)與兩個(gè)抗體發(fā)生反應(yīng)致使FSH分子夾在固相和酶聯(lián)抗體之間。室溫下溫育45分鐘后,用去離子水或蒸餾水洗掉未結(jié)合的標(biāo)記抗體。然后加入四甲基聯(lián)苯胺(TMB),在室溫下溫育20分鐘,溶液逐漸變藍(lán)。加入HCL后,終止顏色變化,溶液zui終呈黃色。再用分光光度計(jì)在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定黃色溶液的吸光值,F(xiàn)SH濃度與檢測(cè)樣品色度成正比關(guān)系。
二、試劑盒的組成
1.包被有抗體的微孔板:96孔,1塊。
2.參照標(biāo)準(zhǔn)品:1套(0,5,15,50,100和200mIU/mL)。
3.酶聯(lián)試劑:13mL。
4.TMB試劑(一步):11mL。
5.終止液(1N HCL):11mL。
三、自備材料
1.精密吸管50µL,100µL,200µL和1.0mL。
2.一次性吸頭。
3.蒸餾水。
4.渦旋混合器或等同物。
5.吸水紙或紙巾。
6.坐標(biāo)紙。
7.酶標(biāo)儀。
四、樣品的采集和準(zhǔn)備
血清由全血樣品制備,用于本試劑盒的血清樣品須無(wú)任何添加物。
五、試劑盒的保存和所用儀器
未啟封的試劑盒須保存在2~8℃下;微孔板放在有干燥劑的密封袋里,以盡量減少其在潮濕空氣中的暴露;已啟封的試劑盒在上述保存條件下,在有效期內(nèi)可保持穩(wěn)定。用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)定吸收值時(shí),要求譜寬≤l0nm,光密度值(O.D.)在0~2之間或更大些。
六、試劑的準(zhǔn)備
1.在檢測(cè)前要使所有試劑達(dá)到室溫(18~25℃,下同)。
2.用1.0mL蒸餾水溶解每個(gè)凍干的標(biāo)準(zhǔn)品(zui少需20分鐘)。已溶解的標(biāo)準(zhǔn)品須在2~8℃下密封保存。
七、檢測(cè)步驟
1.將所需數(shù)量的微孔固定在微孔架上,標(biāo)注加樣順序,制作數(shù)據(jù)表。
2.分別吸取50µL標(biāo)準(zhǔn)品、樣品加入到相應(yīng)的微孔中。建議:雙份設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品、樣品。
3.取100µL酶聯(lián)試劑分別加入到每個(gè)微孔中。
4.充分混合30秒鐘(此步至關(guān)重要)。
5.室溫(18~25℃)溫育約45分鐘。
6.翻轉(zhuǎn)微孔板,棄掉溫育混合物。
7.用蒸餾水沖洗微孔5次(請(qǐng)勿使用自來(lái)水)。
8.在吸水紙或紙巾上扣擊微孔以*除去微孔中殘存的水滴。
9.向每個(gè)微孔中分別加入100µL的TMB試劑,輕輕混合10秒鐘。
10.室溫暗處溫育20分鐘。
11.向每個(gè)微孔加入100µL終止液(1N HCL)終止反應(yīng)。
12.輕輕地混合30秒鐘(確保藍(lán)色全部變成黃色,此步至關(guān)重要)。
13.用酶標(biāo)儀在450m處于15分鐘內(nèi)讀出光密度值。
注意:沖洗是關(guān)鍵步驟,不適當(dāng)?shù)臎_洗會(huì)導(dǎo)致度不準(zhǔn)和吸收值讀數(shù)錯(cuò)誤地升高。
八、結(jié)果計(jì)算
在酶標(biāo)儀上讀出參照標(biāo)準(zhǔn)品、樣品的平均吸收值(A450)。以每個(gè)參照標(biāo)準(zhǔn)品的平均吸收值作縱軸(Y),其相應(yīng)濃度值(mIU/mL)作橫軸(X),在坐標(biāo)紙上繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)每個(gè)樣品的平均吸收植在標(biāo)準(zhǔn)曲線上找出相應(yīng)的FSH濃度值(mIU/mL)。
九、典型曲線實(shí)例
在450nm處測(cè)得的光密度值在Y軸上,其相應(yīng)的FSH濃度值在X軸上,從而得出典型的標(biāo)準(zhǔn)曲線。此標(biāo)準(zhǔn)曲線僅用于示例,不能用于計(jì)算未知樣品。每個(gè)使用者應(yīng)根據(jù)自己的數(shù)據(jù)制作出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
FSH(mIU/mL) | Absorbance(450nm) |
0 | 0.058 |
5 | 0.133 |
15 | 0.265 |
50 | 0.782 |
100 | 1.483 |
200 | 2.885 |
十、期望值和靈敏度
男性(100名)平均正常值:1lmIU/mL;
女性(150名)平均正常值:12mIU/mL;
絕經(jīng)后女性(60名)平均正常值:94mIUI/mL;
懷孕期女性(60名)平均正常值:1.0mIU/mL;
測(cè)得FSHzui低濃度為2.5mIU/mL。
十一、單位換算:1ng/ml=4.2mIU/ml的FSH
商鋪:http://www.zuisujiong.cn/st46201/
主營(yíng)產(chǎn)品:氧化碳培養(yǎng)箱,電泳儀,電泳槽,冰箱,凈化工作臺(tái),顯微鏡,天平、人ELISA試劑盒、大鼠ELISA試劑盒、小鼠ELISA試劑盒、豚鼠ELISA試劑盒、胎牛血清,人細(xì)胞株,移液器,二
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