293T細胞腫瘤類細胞培養(yǎng),就像養(yǎng)孩 子,甚至比養(yǎng)孩子還難。細胞膜與癌變的關(guān)系為:1、細胞惡性 轉(zhuǎn)化過程中,參與糖脂合成的糖基轉(zhuǎn)移酶活性降低,糖鏈末端合 成反應受阻,使糖鏈短缺不全,膜上復雜糖脂量(如GM3)減少 ,而一些簡單的糖脂(如GD3)堆積。細胞膜糖鏈不能接觸延伸 ,黏著力下降,失去接觸抑制。
2、腫瘤細胞膜上某些糖蛋白消失,如纖連蛋白的缺失失去了原 來細胞之間的黏著作用。腫瘤細胞易于脫落,浸潤病灶周圍組織 ,并能通過血液、淋巴液轉(zhuǎn)移支其他部位。同時含唾液酸殘基的 糖蛋白明顯增加,使機體免疫活性細胞不能識別與攻擊它,使腫 瘤細胞逃避宿主的免疫監(jiān)視。
3、腫瘤能合成一些新的低分子量腫瘤特異性抗原,如肝細胞中 的甲胎蛋白(AFP),消化道腫瘤細胞的癌胚抗原(CEA)。
4、離體的細胞培養(yǎng)時,正常細胞生長到彼此相互接觸的密度時 鋪滿成層后便停止生長分裂,稱為接觸抑制。癌細胞卻可無限生 長,不斷增殖、重疊成堆,出現(xiàn)失去抑制和失去控制,造成惡性 增殖。
5、腫瘤細胞在凝集素——伴刀豆球蛋白A(ConA)作用下能產(chǎn)生 凝集現(xiàn)象,而正常細胞卻不發(fā)生凝集。由于腫瘤細胞在加入伴刀 豆球蛋白A后,其細胞表面受體會很快移動集中,與ConA結(jié)合, 因為其受體密度高,會發(fā)生凝集現(xiàn)象。
6、腫瘤細胞的細胞膜通透性增強,受體介導的胞吞作用增強, 腫瘤細胞對氨基酸的轉(zhuǎn)運活性比正常細胞增高達10倍左右,這就 保證了腫瘤細胞惡性增殖的需要。
7、腫瘤細胞膜表面出現(xiàn)微絨毛、皺褶,也常出現(xiàn)變形足或突起 等。
拜力293T細胞提醒進行細胞培養(yǎng)須注 意:體外培養(yǎng)的細胞常遵循一種標準的方式生長。接種后經(jīng)過一 段潛伏期進入指數(shù)生,這一期被稱作對數(shù)期。當細胞密度達 到鋪滿整個瓶底的有效基質(zhì)時,或者當細胞濃度超出培養(yǎng)基的能 力時,細胞生長停止或生長速度大大放緩。這時就需要更頻繁地 更換培養(yǎng)基或者進行分瓶培養(yǎng)。對于貼壁細胞系,分瓶培養(yǎng)也就 是傳代,通常包括去除舊培養(yǎng)基,用消化單層細胞(一些貼 壁能力弱的細胞,如HeLa-S3細胞可通過搖晃培養(yǎng)瓶來傳代), 在培養(yǎng)基中收集細胞,以新培養(yǎng)基稀釋細胞并以適當深度重新接 種于新培養(yǎng)瓶中等步驟。
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