一、目的

目的是確定各種重要表面存在的活體微生物，包括層流工作臺(tái)，實(shí)驗(yàn)設(shè)備（集菌儀），實(shí)驗(yàn)室人員。

二、方法：接觸碟法、擦拭法

1、接觸碟法：是將充滿規(guī)定的瓊脂培養(yǎng)基的接觸碟對(duì)規(guī)則表面或平面進(jìn)行取樣，然后至合適的溫度下培養(yǎng)一定時(shí)間并計(jì)數(shù)。

適用范圍：實(shí)驗(yàn)人員及實(shí)驗(yàn)臺(tái)面等

接觸碟：直徑55cm

取樣面積：約為25cm2

結(jié)果報(bào)告：CFU/碟

培養(yǎng)基：種類、培養(yǎng)條件、培養(yǎng)基質(zhì)量同沉降菌監(jiān)測(cè)

自制接觸碟

與之接觸碟（商品化）

三層嚴(yán)密包裝，內(nèi)層真空封裝

高壓滅菌+鈷60輻射滅菌，確保產(chǎn)品無菌

培養(yǎng)基應(yīng)具有*的彈性、持水性，不會(huì)出現(xiàn)滲水現(xiàn)象。

2-8攝氏度保存，一般保質(zhì)期半年

可根據(jù)客戶需求在培養(yǎng)基中添加*酶等催化酶，用于去除生產(chǎn)中產(chǎn)生的抗生素粉塵的抗菌性。

監(jiān)測(cè)步驟：

1）從冷藏柜中取出接觸皿，并恢復(fù)至室溫。

2）將包裝整體送入取樣地點(diǎn)，在此過程中逐步去掉外面兩層包裝，zui后一層真空包裝在操作間打開。

3）打開接觸皿上蓋，使培養(yǎng)基充分接觸待測(cè)表面，必要使用手指輕輕按壓接觸皿外側(cè)底部中心約10秒，輕輕抬起，將上蓋從接觸皿一側(cè)小心蓋上。

4）在接觸皿磨砂區(qū)域標(biāo)記取樣地點(diǎn)、取樣時(shí)間和取樣人。

5）取樣后的清理：用消毒劑或殺孢子劑擦拭測(cè)試區(qū)域，以消除培養(yǎng)基的殘留。

6）將接觸皿從潔凈室取出，按規(guī)定的溫度和時(shí)間倒置培養(yǎng)。

7）觀察、計(jì)數(shù)

注意：

1）表面微生物檢測(cè)要在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后進(jìn)行。

2）消毒劑殘留物對(duì)監(jiān)測(cè)的影響

測(cè)試表面接觸時(shí)，接觸皿往往會(huì)接觸清洗或消毒潔凈室的消毒劑殘留物。數(shù)百種不同的殺菌劑用于世界各地的制藥設(shè)施，事實(shí)上許多監(jiān)管機(jī)構(gòu)希望看到輪流使用不同消毒原理的兩種消毒劑，這些不同的消毒物質(zhì)會(huì)抑制接觸板上污染物的生長(zhǎng)。

為抵制這些消毒劑的生長(zhǎng)抑制性質(zhì)，中和劑被添加到培養(yǎng)基中。*，聚*酯80，*和*的適當(dāng)組合被認(rèn)定能中和高達(dá)80%的常用消毒劑。

3）方法驗(yàn)證的問題

環(huán)境中分離的代表菌；代表性試驗(yàn)表明；回收率

4）取樣部位

頭部、口罩、肩部、前胸、前臂、手腕、腿部/靴子、眼罩

5）限度的理解：*＜1cfu/碟

舉例：監(jiān)測(cè)了4個(gè)部位（人員）（左上臂接近手腕處，右上臂接近手腕處、前胸、口罩外表面）

不合格結(jié)果：4個(gè)接觸碟平均菌落數(shù)≥1cfu

2、擦拭法：采用合適尺寸的無菌模板或標(biāo)尺確定擦拭的面積，無菌拭子取樣后，拭子置合適的緩沖液或培養(yǎng)基中，充分振蕩，再用適應(yīng)的方法計(jì)數(shù)。是接觸碟法的補(bǔ)充。

浸濕液：通常為無菌鹽水或0.1%的蛋白胨溶液約5毫升

培養(yǎng)基：TSA

計(jì)數(shù)法：平皿涂布法、平皿澆注法、薄膜過濾貼膜法

拭子頭：材料類型包括聚酯、聚氨酯、尼龍和棉

棉簽頭：需要靈活、耐足夠長(zhǎng)的時(shí)間，達(dá)到難以達(dá)到的地點(diǎn)，如管道內(nèi)部。

操作：

1、浸濕拭子：開啟裝有約為5ml的無菌浸濕液的小試管（到帶有螺旋帽的），將拭子頭部浸濕，緊貼管內(nèi)壁轉(zhuǎn)動(dòng)，擠壓出多余的溶液。

2、擦拭表面：拿住拭子柄與待測(cè)物表面成30度角，緩慢并全部涂抹待測(cè)物表面三次，沒涂抹一次注意翻轉(zhuǎn)拭子頭的方向。

3、涂抹后折斷拭子頭放入浸濕液試管中蓋上帽，充分振蕩帶拭子的試管10秒，取出1ml混懸液接種到滅菌平皿中。

4、澆注滅菌TSA培養(yǎng)基 ，培養(yǎng)，計(jì)數(shù)。

注意：

1）表面微生物檢測(cè)要在試驗(yàn)結(jié)束后進(jìn)行

2）消毒劑殘留物對(duì)監(jiān)測(cè)的影響

3）取樣位置

4）取樣方式

5）方法驗(yàn)證問題