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當(dāng)前位置:上海永葉生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>表面微生物監(jiān)測
一、目的
目的是確定各種重要表面存在的活體微生物,包括層流工作臺,實驗設(shè)備(集菌儀),實驗室人員。
二、方法:接觸碟法、擦拭法
1、接觸碟法:是將充滿規(guī)定的瓊脂培養(yǎng)基的接觸碟對規(guī)則表面或平面進行取樣,然后至合適的溫度下培養(yǎng)一定時間并計數(shù)。
適用范圍:實驗人員及實驗臺面等
接觸碟:直徑55cm
取樣面積:約為25cm2
結(jié)果報告:CFU/碟
培養(yǎng)基:種類、培養(yǎng)條件、培養(yǎng)基質(zhì)量同沉降菌監(jiān)測
自制接觸碟
與之接觸碟(商品化)
三層嚴(yán)密包裝,內(nèi)層真空封裝
高壓滅菌+鈷60輻射滅菌,確保產(chǎn)品無菌
培養(yǎng)基應(yīng)具有*的彈性、持水性,不會出現(xiàn)滲水現(xiàn)象。
2-8攝氏度保存,一般保質(zhì)期半年
可根據(jù)客戶需求在培養(yǎng)基中添加*酶等催化酶,用于去除生產(chǎn)中產(chǎn)生的抗生素粉塵的抗菌性。
監(jiān)測步驟:
1)從冷藏柜中取出接觸皿,并恢復(fù)至室溫。
2)將包裝整體送入取樣地點,在此過程中逐步去掉外面兩層包裝,zui后一層真空包裝在操作間打開。
3)打開接觸皿上蓋,使培養(yǎng)基充分接觸待測表面,必要使用手指輕輕按壓接觸皿外側(cè)底部中心約10秒,輕輕抬起,將上蓋從接觸皿一側(cè)小心蓋上。
4)在接觸皿磨砂區(qū)域標(biāo)記取樣地點、取樣時間和取樣人。
5)取樣后的清理:用消毒劑或殺孢子劑擦拭測試區(qū)域,以消除培養(yǎng)基的殘留。
6)將接觸皿從潔凈室取出,按規(guī)定的溫度和時間倒置培養(yǎng)。
7)觀察、計數(shù)
注意:
1)表面微生物檢測要在實驗結(jié)束后進行。
2)消毒劑殘留物對監(jiān)測的影響
測試表面接觸時,接觸皿往往會接觸清洗或消毒潔凈室的消毒劑殘留物。數(shù)百種不同的殺菌劑用于世界各地的制藥設(shè)施,事實上許多監(jiān)管機構(gòu)希望看到輪流使用不同消毒原理的兩種消毒劑,這些不同的消毒物質(zhì)會抑制接觸板上污染物的生長。
為抵制這些消毒劑的生長抑制性質(zhì),中和劑被添加到培養(yǎng)基中。*,聚*酯80,*和*的適當(dāng)組合被認(rèn)定能中和高達80%的常用消毒劑。
3)方法驗證的問題
環(huán)境中分離的代表菌;代表性試驗表明;回收率
4)取樣部位
頭部、口罩、肩部、前胸、前臂、手腕、腿部/靴子、眼罩
5)限度的理解:*<1cfu/碟
舉例:監(jiān)測了4個部位(人員)(左上臂接近手腕處,右上臂接近手腕處、前胸、口罩外表面)
不合格結(jié)果:4個接觸碟平均菌落數(shù)≥1cfu
2、擦拭法:采用合適尺寸的無菌模板或標(biāo)尺確定擦拭的面積,無菌拭子取樣后,拭子置合適的緩沖液或培養(yǎng)基中,充分振蕩,再用適應(yīng)的方法計數(shù)。是接觸碟法的補充。
浸濕液:通常為無菌鹽水或0.1%的蛋白胨溶液約5毫升
培養(yǎng)基:TSA
計數(shù)法:平皿涂布法、平皿澆注法、薄膜過濾貼膜法
拭子頭:材料類型包括聚酯、聚氨酯、尼龍和棉
棉簽頭:需要靈活、耐足夠長的時間,達到難以達到的地點,如管道內(nèi)部。
操作:
1、浸濕拭子:開啟裝有約為5ml的無菌浸濕液的小試管(到帶有螺旋帽的),將拭子頭部浸濕,緊貼管內(nèi)壁轉(zhuǎn)動,擠壓出多余的溶液。
2、擦拭表面:拿住拭子柄與待測物表面成30度角,緩慢并全部涂抹待測物表面三次,沒涂抹一次注意翻轉(zhuǎn)拭子頭的方向。
3、涂抹后折斷拭子頭放入浸濕液試管中蓋上帽,充分振蕩帶拭子的試管10秒,取出1ml混懸液接種到滅菌平皿中。
4、澆注滅菌TSA培養(yǎng)基 ,培養(yǎng),計數(shù)。
注意:
1)表面微生物檢測要在試驗結(jié)束后進行
2)消毒劑殘留物對監(jiān)測的影響
3)取樣位置
4)取樣方式
5)方法驗證問題
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