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CHO細(xì)胞宿主蛋白(CHO-HCP)試劑盒使用說明書

時間:2017-8-17閱讀:379
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本試劑盒僅供研究使用。

                                                                     96T

使用目的:

本試劑盒用于測定血清、血漿及相關(guān)液體樣本中CHO細(xì)胞宿主蛋白(CHO-HCP)表達。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中CHO細(xì)胞宿主蛋白(CHO-HCP表達。用純化的CHO細(xì)胞宿主蛋白(CHO-HCP抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中CHO細(xì)胞宿主蛋白(CHO-HCP相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的CHO細(xì)胞宿主蛋白(CHO-HCP)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中CHO細(xì)胞宿主蛋白(CHO-HCP的存在與否。

試劑盒組成

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止液

6ml×1

2

酶標(biāo)試劑

6ml×1

8

陽性對照

0.5ml×1

3

酶標(biāo)包被板

12孔×8

9

陰性對照

0.5ml×1

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

說明書

1

5

顯色劑A

6ml×1

11

封板膜

2 

6

顯色劑B

6ml×1/

12

密封袋

1

標(biāo)本要求

1.標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

  1. 編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
  2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
  3. 溫育:用封板膜封板后置37溫育30分鐘。  
  4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
  5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
  6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
  7. 溫育:操作同3
  8. 洗滌:操作同5。
  9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37避光顯色15分鐘.
  10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
  11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

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