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T3體外轉(zhuǎn)錄試劑盒

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更新時(shí)間：2018-06-13 15:18:49瀏覽次數(shù)：231次

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

T3體外轉(zhuǎn)錄試劑盒本試劑盒是基于沙門(mén)氏菌噬菌體T3 RNA聚合酶的RNA體外轉(zhuǎn)錄試劑盒，它利用含有T3啟動(dòng)子的模版DNA，以NTP為底物，從T3啟動(dòng)子下游開(kāi)始合成與模版DNA中一條鏈互補(bǔ)的RNA，簡(jiǎn)單快速獲得大量的RNA分子。本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn)：
1. 即開(kāi)即用，用戶只需提供含T3啟動(dòng)子的DNA模板即可以進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)，不需要單獨(dú)準(zhǔn)備每一個(gè)成份。

詳細(xì)介紹

 

T3體外轉(zhuǎn)錄試劑盒

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規(guī)格

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手冊(cè)

T3體外轉(zhuǎn)錄試劑盒

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1490元

 

本試劑盒是基于沙門(mén)氏菌噬菌體T3 RNA聚合酶的RNA體外轉(zhuǎn)錄試劑盒，它利用含有T3啟動(dòng)子的模版DNA，以NTP為底物，從T3啟動(dòng)子下游開(kāi)始合成與模版DNA中一條鏈互補(bǔ)的RNA，簡(jiǎn)單快速獲得大量的RNA分子。本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn)：

1. 即開(kāi)即用，用戶只需提供含T3啟動(dòng)子的DNA模板即可以進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)，不需要單獨(dú)準(zhǔn)備每一個(gè)成份。

2. 單溶液預(yù)配液，減少加樣次數(shù)，避免了操作誤差，增加了可重復(fù)性。

3. 模版DNA可以是線性化的質(zhì)粒DNA，也可以是PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。

4. 可以合成的RNA的長(zhǎng)度在20 nt到5000 nt之間。

5. 產(chǎn)品配方經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化，每  μg DNA模版可以合成2-6 μg RNA。

6. 得到的RNA可以用于RNA 結(jié)構(gòu)研究、核酶生物化學(xué)、體外翻譯、RNA-蛋白質(zhì)相互作用、反義技術(shù)、SELEX 技術(shù)和 RNA 干擾（RNAi）等實(shí)驗(yàn)。

7. 提供A和B兩種包裝，A型只有轉(zhuǎn)錄試劑，B型還有去除模版殘留RNase的蛋白酶K溶液、反應(yīng)結(jié)束后去除DNA模版的RNase-free DNase溶液、后沉淀回收RNA的微量核酸沉淀劑。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)。水相層(無(wú)色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過(guò)離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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