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天凈沙單細(xì)胞RNA擴(kuò)增試劑盒

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更新時(shí)間：2018-06-13 15:33:41瀏覽次數(shù)：512次

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天凈沙單細(xì)胞RNA擴(kuò)增試劑盒一個(gè)哺乳動(dòng)物單細(xì)胞一般只有約10pg的總RNA，其中的mRNA只有1-5%（約10E5-10E6個(gè)分子）,因此直接用單細(xì)胞進(jìn)行mRNA擴(kuò)增具有極大的技術(shù)難度。本公司進(jìn)過(guò)精心研究，整合技術(shù)，開發(fā)出了可以直接用單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行mRNA擴(kuò)增的試劑盒，本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn)：
1. 雙向，既可用于制備正義的mRNA，也可用于制備反義的aRNA（antisense RNA）或cRN

詳細(xì)介紹

天凈沙單細(xì)胞RNA擴(kuò)增試劑盒

名稱	規(guī)格	價(jià)格	手冊(cè)
天凈沙單細(xì)胞RNA擴(kuò)增試劑盒	80次	詢價(jià)

一個(gè)哺乳動(dòng)物單細(xì)胞一般只有約10pg的總RNA，其中的mRNA只有1-5%(約10E5-10E6個(gè)分子),因此直接用單細(xì)胞進(jìn)行mRNA擴(kuò)增具有極大的技術(shù)難度。本公司進(jìn)過(guò)精心研究，整合技術(shù)，開發(fā)出了可以直接用單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行mRNA擴(kuò)增的試劑盒，本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn)：

1. 雙向，既可用于制備正義的mRNA，也可用于制備反義的aRNA（antisense RNA）或cRNA（complimenary RNA）。

2. 直接用單細(xì)胞裂解液進(jìn)行反應(yīng)，免RNA提取，整個(gè)過(guò)程只需要半天。

3. 適用于多種單細(xì)胞，包括卵細(xì)胞、干細(xì)胞、FACS分離細(xì)胞等單細(xì)胞，還可用于培養(yǎng)細(xì)胞和胚胎等實(shí)體租組織（需要單細(xì)胞化），也可以使用10pg-10ng純化的總RNA作為模板。

4. 假陰性和假陽(yáng)性率均小于6%，RNA擴(kuò)增成功率為90%。

5. 所得mRNA或aRNA（cRNA）可以直接用于后續(xù)的RT-PCR、芯片雜交、表達(dá)譜分析等實(shí)驗(yàn)。

6. 本試劑盒足夠?qū)?0個(gè)單細(xì)胞進(jìn)行單細(xì)胞RNA擴(kuò)增。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無(wú)色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過(guò)離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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