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雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒

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雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒由于檢測(cè)光量子的方法非常敏感，采用生物發(fā)光（bioluminescent）法，是報(bào)告基因檢測(cè)較常用的有效手段。熒光素酶（luciferase）催化底物熒光素（luciferin）的轉(zhuǎn)化，發(fā)射出光子。螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase）和海腎熒光素酶（Ranilla luciferase）催化的發(fā)光反應(yīng)，具有相似的光學(xué)特征和很好的濃度線性范圍（7~8

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雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒

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雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒	100次	詢價(jià)

由于檢測(cè)光量子的方法非常敏感，采用生物發(fā)光（bioluminescent）法，是報(bào)告基因檢測(cè)常用的有效手段。熒光素酶（luciferase）催化底物熒光素（luciferin）的轉(zhuǎn)化，發(fā)射出光子。螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase）和海腎熒光素酶（Ranilla luciferase）催化的發(fā)光反應(yīng)，具有相似的光學(xué)特征和很好的濃度線性范圍（7~8個(gè)數(shù)量級(jí)的線性范圍），酶的檢測(cè)靈敏度達(dá)10-18~10-20 mol，但兩者催化的化學(xué)反應(yīng)底物和適反應(yīng)條件*不同。利用這一特性，將這兩種熒光素酶配合，即可形成十分有效的雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)，其中Ranilla luciferase通常作為內(nèi)參照。本試劑盒提供了一體化形式的雙熒光素酶檢測(cè)系統(tǒng)。采用通用裂解緩沖液，適合于兩種熒光素酶活性的保持，且與其他類型的報(bào)告基因檢測(cè)和蛋白含量檢測(cè)兼容。優(yōu)化的兩種酶反應(yīng)體系，使每種發(fā)光反應(yīng)持續(xù)數(shù)十分鐘，以便于手工操作多個(gè)樣品，并保證Firefly luciferase發(fā)光及時(shí)淬滅，不影響后續(xù)Ranilla luciferase的測(cè)定。優(yōu)化的反應(yīng)體系還使兩種熒光素酶活性比值趨于合理的敏感范圍，更有利于后續(xù)數(shù)據(jù)的比較。該產(chǎn)品特點(diǎn)如下：
1. 準(zhǔn)確性高：使用海腎熒光素酶作為內(nèi)參照，減少了細(xì)胞數(shù)目、細(xì)胞健康狀態(tài)、轉(zhuǎn)染效率和非特異性細(xì)胞反應(yīng)等因素的影響，使主報(bào)告基因的結(jié)果歸一化
2. 高度靈敏：對(duì)兩種熒光素酶的檢測(cè)靈敏度達(dá)10-18~10-20 mol
3. 線性范圍寬：線性范圍達(dá)到7~8個(gè)數(shù)量級(jí)
4. 快速簡(jiǎn)便：一體化兩步法檢測(cè)，特別適合于高通量篩選
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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