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AFLP試劑盒（EcoRI-MseI）

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更新時間：2018-06-19 15:23:47瀏覽次數(shù)：355次

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產(chǎn)品簡介

AFLP試劑盒（EcoRI-MseI）AFLP（amplified fragment length polymorphism）原理是一種結(jié)合RFLP和PCR技術(shù)特點的、迄今為止較有效分子標(biāo)記分型技術(shù)，本產(chǎn)品在傳統(tǒng)AFLP-PCR的基礎(chǔ)上經(jīng)過精心優(yōu)化而開發(fā)，它具有下列特點：
1. 一站式，足夠50次酶切-連接反應(yīng)、50次預(yù)擴(kuò)反應(yīng)和1600次AFLP PCR（PCR按30 uL體系計算），但不包括DN

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AFLP試劑盒（EcoRI-MseI）

名稱	規(guī)格	價格	手冊
AFLP試劑盒（EcoRI-MseI）	1600次	詢價

AFLP（amplified fragment length polymorphism）原理是一種結(jié)合RFLP和PCR技術(shù)特點的、迄今為止有效分子標(biāo)記分型技術(shù)，本產(chǎn)品在傳統(tǒng)AFLP-PCR的基礎(chǔ)上經(jīng)過精心優(yōu)化而開發(fā)，它具有下列特點：
1. 一站式，足夠50次酶切-連接反應(yīng)、50次預(yù)擴(kuò)反應(yīng)和1600次AFLP PCR（PCR按30 uL體系計算），但不包括DNA純化和帶型分析試劑（如PAGE電泳試劑和銀染試劑）。
2. 本系列產(chǎn)品提供EcoRI-MseI組合，適用于GC含量在50%以上的基因組。對GC含量在50%以下的基因組，需要另購AFLP（EcoRI-TaqI）組合。
3. 各種參數(shù)都經(jīng)過優(yōu)化，一次PCR所得AFLP片段數(shù)一般在10-100之間，可重復(fù)性好，誤差小于0.6%。
4. 本產(chǎn)品適用于基因組在500 Mb-6000 Mb的材料（如動物和植物），對于基因組在50-500 Mb的材料（如細(xì)菌和真菌）或50Mb以下的材料（如質(zhì)粒，cosmid，BAC，YAC和PAC等），需要分別另購專門的+1型預(yù)擴(kuò)引物混合液和+3型EcoRI引物（8種）AFLP引物對。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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