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Long-Taq DNA聚合酶

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Long-Taq DNA聚合酶由在普通Taq DNA聚合酶進(jìn)行基因工程優(yōu)化的快速DNA聚合酶基礎(chǔ)商制成的混合酶，配以專為長(zhǎng)片段PCR優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液，特別適合對(duì)長(zhǎng)片段的擴(kuò)增。LF-Taq 擴(kuò)增性能優(yōu)異, 能在短時(shí)間內(nèi)完成高效的PCR擴(kuò)增.

詳細(xì)介紹

Long-Taq DNA聚合酶

名稱	規(guī)格	價(jià)格	手冊(cè)
Long-Taq DNA聚合酶	500 U	119元

本產(chǎn)品由在普通Taq DNA聚合酶進(jìn)行基因工程優(yōu)化的快速DNA聚合酶基礎(chǔ)商制成的混合酶，配以專為長(zhǎng)片段PCR優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液，特別適合對(duì)長(zhǎng)片段的擴(kuò)增。LF-Taq 擴(kuò)增性能優(yōu)異, 能在短時(shí)間內(nèi)完成高效的PCR擴(kuò)增.用普通Taq DNA聚合酶的進(jìn)行PCR反應(yīng)延伸時(shí)間一般為1kb/min,快速DNA聚合酶為1kb/10-15 sec,進(jìn)行8kb產(chǎn)物的PCR反應(yīng)可在1小時(shí)內(nèi)完成. LF-Taq對(duì)簡(jiǎn)單模板的擴(kuò)增可達(dá)40kb,對(duì)復(fù)雜模板的擴(kuò)增也可達(dá)20kb.本制品使用領(lǐng)產(chǎn)工藝生產(chǎn),經(jīng)過(guò)兩次過(guò)柱純化,純化>98%,*去除外源蛋白和核酸污染。其特點(diǎn)如下：
1. 為長(zhǎng)片段擴(kuò)增特別優(yōu)化，使用常規(guī)PCR Buffer即可擴(kuò)增8-10kb，使用超長(zhǎng)Buffer擴(kuò)增長(zhǎng)度可達(dá)20-40kb。
2．反應(yīng)速度快，聚合速度高達(dá)10-15sec/kb，可為科研人員節(jié)約多達(dá)70%的實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
3．?dāng)U增效率高，同等條件下產(chǎn)量遠(yuǎn)高于普通Taq酶，在擴(kuò)增片段時(shí)優(yōu)勢(shì)尤其明顯。
4．比活性高，分子量小于普通Taq酶。在相同酶量下有更高的酶活性。
5．低背景，顯著減少非特異性條帶和引物二聚體。
6．高穩(wěn)定性，耐熱性能，Long-Taq酶的T1/2=2.5-3 hour（100℃），12 hour（95℃），普通Taq酶的T1/2=1.6 hour（95℃），特別適合對(duì)高GC含量的模板的擴(kuò)增。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)。水相層(無(wú)色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過(guò)離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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