本產(chǎn)品采用層析式雙抗體夾心法檢測(cè)Cas12/13的標(biāo)記探針。用戶(hù)僅需在探針設(shè)計(jì)時(shí)將一端標(biāo)記生物su（Biotin），另一端標(biāo)記異硫氰酸熒光素（FITC）或6-羧基熒光素（6-FAM），即可使用本產(chǎn)品檢測(cè)目的基因LAMP、RAA或RPA等溫?cái)U(kuò)增后的Cas酶切產(chǎn)物。

預(yù)期用途:

核酸擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)。

包裝規(guī)格/貨號(hào):

包裝規(guī)格：10條/包×5，鋁箔袋防潮包裝。

圖1. 一次性檢測(cè)試紙條結(jié)構(gòu)示意圖

儲(chǔ)存條件及有效期:

儲(chǔ)存條件：存放于避光干燥處，儲(chǔ)存溫度4~30℃。

有效期：12個(gè)月。

操作步驟:

1. 根據(jù)檢測(cè)樣品數(shù)量取出相應(yīng)數(shù)量的試紙條，并在吸收墊（圖1）上做好標(biāo)記。每根試紙條只能用于單次、單個(gè)樣品的檢測(cè)。擴(kuò)增產(chǎn)物體積為50~100µL時(shí)，可直接在200µL PCR反應(yīng)管中檢測(cè)核酸產(chǎn)物，產(chǎn)物體積不足50µL時(shí)，需在PCR管內(nèi)加超純水補(bǔ)足體積至50µL，吸打混勻后，才能進(jìn)行檢測(cè)。

2. PCR、RPA或RAA反應(yīng)結(jié)束后，打開(kāi)PCR反應(yīng)管，將試紙條結(jié)合墊端（箭頭端）插入PCR反應(yīng)管（圖1），液面不得超過(guò)結(jié)合墊上端，待判讀區(qū)全部浸潤(rùn)（約需1～2min，外界環(huán)境溫度較低時(shí)，如冬季，會(huì)降低吸水速度，判讀區(qū)浸潤(rùn)時(shí)間將會(huì)延長(zhǎng)），待質(zhì)控線(xiàn)（C線(xiàn)）顯色后，可以將試紙條拿出。根據(jù)試紙條顯情況直接讀取檢測(cè)結(jié)果。

3. 質(zhì)控線(xiàn)（T線(xiàn)）顯色后10min內(nèi)觀(guān)察結(jié)果，10min后判讀無(wú)效。

4. 記錄檢測(cè)結(jié)果，將試紙條密封丟棄在安全處。

結(jié)果判讀:

圖2. Cas12/13檢測(cè)試紙條結(jié)果判讀示意圖

1. 陽(yáng)性（+）：

2. C線(xiàn)）和檢測(cè)線(xiàn)（T線(xiàn)）均出現(xiàn)紅色條帶；試紙條質(zhì)控線(xiàn)（C線(xiàn)）不顯色，檢測(cè)線(xiàn)（T線(xiàn)）出現(xiàn)紅色條帶。上述兩種情況均說(shuō)明Cas12/13可進(jìn)行有效切割，并激活報(bào)告基團(tuán)顯色，結(jié)果均可判定為陽(yáng)性。

3. 陰性（-）：

4. C線(xiàn)）出現(xiàn)一條紅色條帶，檢測(cè)線(xiàn)（T線(xiàn)）不顯色，判定為陰性結(jié)果。該結(jié)果表明Cas12/13未能切割報(bào)告分子，未能激活報(bào)告基團(tuán)顯色。

5. 無(wú)效：

6. C線(xiàn)）和檢測(cè)線(xiàn)（T線(xiàn)）均未出現(xiàn)條帶，提示所用的試紙條或擴(kuò)增試劑可能已經(jīng)損壞、失效或操作有誤。此時(shí)，應(yīng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，重新擴(kuò)增和檢測(cè)。如果問(wèn)題仍然存在，應(yīng)立即停止使用同一批號(hào)的產(chǎn)品。

注意事項(xiàng)及安全提示:

1. 本產(chǎn)品應(yīng)結(jié)合探針使用，如探針合成純度不足，即探針含游離的Biotin或者游離的FITC時(shí)，會(huì)導(dǎo)致以超純水作陰性對(duì)照的切割產(chǎn)物T線(xiàn)顯紅色，即陰性對(duì)照呈現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。

2. 本產(chǎn)品可用于探針合成質(zhì)量的檢測(cè)。調(diào)整空白陰性對(duì)照中探針的使用濃度至200 nM，并進(jìn)行切割反應(yīng)。當(dāng)試紙條結(jié)合墊端浸入Cas12/Cas13切割產(chǎn)物后的5~7 min內(nèi)，試紙條T線(xiàn)顯紅色，即說(shuō)明探針純度難以滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)要求，會(huì)因探針純度不足導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。建議更換探針合成供應(yīng)商，并重新合成探針。本產(chǎn)品在探針使用濃度為20~50nM的情況下，試紙條結(jié)合墊端浸入Cas12/Cas13切割產(chǎn)物后的30 min內(nèi)，T線(xiàn)均不會(huì)顯色。

3. 本產(chǎn)品僅供科研使用。使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作。違反或者未按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作可能導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果。

4. 產(chǎn)品應(yīng)依照說(shuō)明書(shū)要求，儲(chǔ)存于合適的環(huán)境和溫度下，并在有效期內(nèi)使用。儲(chǔ)存不當(dāng)或產(chǎn)品過(guò)期可能導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果。打開(kāi)包裝后請(qǐng)盡快使用試紙條，以免因試紙條受潮影響試驗(yàn)結(jié)果。檢測(cè)環(huán)境光線(xiàn)不足，操作者色弱等因素均可能導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果。

5. 使用完畢后，應(yīng)盡快將紙條裝進(jìn)密封袋，妥善處理。本產(chǎn)品為一次性使用產(chǎn)品，請(qǐng)勿重復(fù)使用。