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鬼筆環(huán)肽-加州紅標記探針會選擇性地結(jié)合F-肌動蛋白。以納摩爾濃度使用，鬼筆環(huán)肽衍生物是方便的探針，用于標記，鑒定和定量甲醛固定和透化組織切片中的F-肌動蛋白，細胞培養(yǎng)物或無細胞實驗。肌動蛋白是一種球狀的，大約42kDa的蛋白質(zhì)，幾乎存在于所有真核細胞中。 它也是最高度保守的蛋白質(zhì)之一，與藻類和人類不同的物種相差不超過20％。 肌動蛋白是細胞中兩種細絲的單體亞基：微絲，細胞骨架的三個主要組分之一，以及微絲，是肌細胞中收縮裝置的一部分。 因此，肌動蛋白參與許多重要的細胞過程，包括肌肉收縮，細胞運動，細胞分裂和胞質(zhì)分裂，囊泡和細胞器運動，細胞信號傳導，以及細胞連接和細胞形狀的建立和維持。
本品以1000×儲存液形式（溶于DMSO）提供。按照100µl/孔（96孔板），總共可做300T。
操作步驟
1.制備1X鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液：加入1μL1000X鬼筆環(huán)肽綴合物DMSO溶液至1 mL含1％BSA的PBS。
注意1：鬼筆環(huán)肽綴合物的未使用的1000X DMSO儲備溶液應等分并儲存在-20℃，避光。
注意2：不同的細胞類型可能染色不同。 應相應地制備鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液的濃度。
2.染色細胞：
2.1執(zhí)行甲醛固定。 在室溫下將含3.0-4.0％甲醛的細胞在PBS中孵育10-30分鐘。
注意：避免使用任何含甲醇的固定劑，因為甲醇會在固定過程中破壞肌動蛋白。 優(yōu)選的固定劑是不含甲醇的甲醛。
2.2用PBS沖洗固定的細胞2-3次。
2.3可選：在PBS中加入0.1％Triton X-100固定細胞3至5分鐘，以增加滲透性。 用PBS沖洗細胞2-3次。
2.4將100μL/孔（96孔板）鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液加入固定的細胞，并在室溫下染色細胞20至90分鐘。
2.5在加上蓋玻片之前，用PBS輕輕沖洗細胞2至3次以除去過量的鬼筆環(huán)肽綴合物，然后在顯微鏡下進行，密封和成像。
注意事項
1）DMSO有毒，使用時請小心操作。
2）了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
Note: 鬼筆環(huán)肽具有毒性，需小心操作（對人，其半數(shù)致死劑量為2mg/Kg）。
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