目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>生化檢測試劑盒>>脂肪酸代謝系列>> 酰基轉(zhuǎn)移酶（AAT）測試盒微量法
| 貨號 | BK-01S6643 |
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本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費(fèi)代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
?；D(zhuǎn)移酶（AAT）測試盒微量法 | 100管/96樣 | 微量法 | BK-01S6643 |
商品介紹：
測定意義: AAT是一個多功能蛋白大家族，主要負(fù)責(zé)催化生物體內(nèi)各種?；腿ヵ；磻?yīng)，在基因表達(dá)、代謝和信號傳導(dǎo)中具有重要作用。 測定原理： AAT催化乙酰CoA轉(zhuǎn)移乙酰基到丁醇，釋放的CoA還原DTNB生成TNB；TNB在412nm有吸收峰，測定412 nm吸光度增加速率可計算AAT活性。 自備儀器和用品： 研缽、冰、臺式離心機(jī)、可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。 |
試劑組成和配制:
提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
實驗結(jié)果判斷我有妙招：
1、定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。
3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照，與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求：
① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封，放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。
② 與水蒸氣，水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封，并遠(yuǎn)離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑，應(yīng)將其固體或晶體密封保存，不宜長期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存，其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng)，所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風(fēng)處保存。
操作步驟：
1. 樣品的準(zhǔn)備：
a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測定。
2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進(jìn)行稀釋，即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進(jìn)行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
100mg 活性藍(lán) 19 Remazol Brilliant Blue R-D-Xylan 室溫保存
50T 水稻內(nèi)源基因PCR檢測試劑盒 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
1g 甲基綠 Methyl Green 室溫干燥保存
500mL Gelatin Blocking Buffer in TBS with azide Gelatin Blocking Buffer in TBS with azide 常溫保存
5次 ECL法辛雜交檢測試劑盒 ECL DIG Detection Kit 10×封堵液需要-20℃保存，AP標(biāo)記的抗DIG抗體和ECL底物需要4℃保存
2 ug pJM17 pJM17 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
溴甲紫蛋白胨培養(yǎng)液 Bromocresol Purple Peptone Medium 250g
1瓶 NBLE細(xì)胞株 NBLE 低溫運(yùn)輸和保存
嗜冷菌計數(shù)瓊脂 Psychrophilic bacteria count agar 250g
1g 酸性 Phosphatase，Acid -20℃保存
100mL TB Solution-I TB Solution-I 常溫保存
?；D(zhuǎn)移酶（AAT）測試盒微量法Donkey Anti-human IgG 驢抗人IgG 規(guī)格: 1mg
phospho-AKT/PKB(Ser473) 磷酸化蛋白激B抗體 規(guī)格: 0.1ml
IL-17RD 白介素17受體D抗體 規(guī)格: 0.1ml
MTCP1 成熟T淋巴細(xì)胞增蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-Goat IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗羊IgG 規(guī)格: 0.1ml
Caspase-13/4 半胱胺酸蛋白蛋白-13抗體 規(guī)格: 0.2ml
APG5L/ATG5 自噬蛋白5/細(xì)胞凋亡的特異性蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-Tau protein(Thr212) 磷酸化微管相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-rat IgM 兔抗大鼠IgM 規(guī)格: 1mg
FRG2B FRG2B蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
OST-beta 有機(jī)溶質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白OSTβ抗體 0.2ml
Collagen II/Chondrocalcin Ⅱ型膠原α1蛋白/軟骨鈣素抗體 規(guī)格: 0.1ml
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)
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