通用名：禽呼腸孤病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Avian reovirus,ARV (ELISA)

【包裝規(guī)格】 96T×1/盒

【預(yù)期用途】禽呼腸孤病毒是由呼腸孤病毒(Avian reovirus,ARV)引起雞多種疾病，包括病毒性關(guān)節(jié)炎、矮小綜合征、呼吸道疾病、腸道疾病和所謂吸收不良綜合征，是一種傳染性疾病。本病呈世界性分布，是嚴重危害養(yǎng)禽業(yè)的最主要疫病之一。疫苗免疫是預(yù)防和控制禽呼腸孤病毒發(fā)生的*途徑，而免疫后抗體水平的高低反映實際的疫苗免疫效果，直接關(guān)系到免疫雞群對禽呼腸孤病毒的抵抗力。

    本試劑盒適用于：雞血清抗體的檢測，以確定被檢雞是否感染禽呼腸孤病毒或免疫雞體內(nèi)抗體水平；評估雞群感染ARV的風險程度，為ARV免疫程序的制定提供參考。

【原理】

本試劑盒由預(yù)包被禽呼腸孤病毒重組蛋白的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用間接酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測雞血清或血漿中雞傳染性喉氣管炎病毒抗體。實驗時，在酶標板中加入對照血清和待檢血清，再加入HRP標記的檢測抗體，經(jīng)溫育后，若樣品中含有禽呼腸孤病毒的抗體，則將與酶標板上抗原抗體結(jié)合，經(jīng)*洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；在孔中加底物液TMB，與酶標結(jié)合物反應(yīng)形成藍色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有禽呼腸孤病毒抗體。

【試劑盒組成】

【儲存及有效期】 2～8℃保存，有效期6個月。

包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。

【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。

【樣品準備】

1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。

2. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水.

【檢驗方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量酶標板條，設(shè)空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.陰性、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照50μl；樣品孔每孔加入待測樣本50μL，空白孔不加。

4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，靜置，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.甩去孔內(nèi)液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔依次加底物液A、底物液B各50μL，蓋好蓋板膜，置37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，于450nm波長處測定各孔吸光值（A值），無參比波長用空白孔調(diào)零(即所有孔吸光值減去空白孔吸光值)。

【參考值】 實驗正常的情況下，陰性對照≤0.2，陽性對照≥0.8。

【檢驗結(jié)果的解釋】

1.C.O（臨界值）=0.25+陰性對照孔均值。

2.陽性判斷（Cut-Off值）：陰性對照OD值+0.25，樣本OD值大于閾值，判定為陽性，反之，為陰性。。

【試驗方法的局限性】

該試驗僅作為定性檢測雞血清或血漿中禽呼腸孤病毒抗體，根據(jù)A值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。

【注意事項】

1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。

3.底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍的底物液不能使用。

4.酶標板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，以防水滴凝聚在冷板條上。未用完酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

5.洗板不正確可以導(dǎo)致不準確的結(jié)果，在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

6.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈，消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

7.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。

8.試驗結(jié)果的判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。

9.不同批號試劑組分不得混用。