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通用名:禽呼腸孤病毒抗體檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
英文名:Test Kit for Antibodies to Avian reovirus,ARV (ELISA)
【包裝規(guī)格】 96T×1/盒
【預(yù)期用途】禽呼腸孤病毒是由呼腸孤病毒(Avian reovirus,ARV)引起雞多種疾病,包括病毒性關(guān)節(jié)炎、矮小綜合征、呼吸道疾病、腸道疾病和所謂吸收不良綜合征,是一種傳染性疾病。本病呈世界性分布,是嚴重危害養(yǎng)禽業(yè)的最主要疫病之一。疫苗免疫是預(yù)防和控制禽呼腸孤病毒發(fā)生的*途徑,而免疫后抗體水平的高低反映實際的疫苗免疫效果,直接關(guān)系到免疫雞群對禽呼腸孤病毒的抵抗力。
本試劑盒適用于:雞血清抗體的檢測,以確定被檢雞是否感染禽呼腸孤病毒或免疫雞體內(nèi)抗體水平;評估雞群感染ARV的風險程度,為ARV免疫程序的制定提供參考。
【原理】
本試劑盒由預(yù)包被禽呼腸孤病毒重組蛋白的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成,應(yīng)用間接酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測雞血清或血漿中雞傳染性喉氣管炎病毒抗體。實驗時,在酶標板中加入對照血清和待檢血清,再加入HRP標記的檢測抗體,經(jīng)溫育后,若樣品中含有禽呼腸孤病毒的抗體,則將與酶標板上抗原抗體結(jié)合,經(jīng)*洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后;在孔中加底物液TMB,與酶標結(jié)合物反應(yīng)形成藍色產(chǎn)物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān);加入終止液終止反應(yīng)后,產(chǎn)物變?yōu)辄S色;用酶標儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值,即可知樣品是否含有禽呼腸孤病毒抗體。
【試劑盒組成】
序號 | 名稱 | 規(guī)格/96T×1 |
1 | 微孔酶標板 | 96孔 |
2 | 陰性對照 | 0.3mL |
3 | 陽性對照 | 0.3mL |
4 | 樣本稀釋液 | 6mL |
5 | 檢測抗體-HRP | 10mL |
6 | 20×洗滌緩沖液 | 25mL |
7 | 底物A | 6mL |
8 | 底物B | 6mL |
9 | 終止液 | 6mL |
10 | 封板膜 | 2張 |
11 | 說明書 | 1份 |
12 | 自封袋 | 1個 |
13 | 微孔酶標板 | 96孔 |
【儲存及有效期】 2~8℃保存,有效期6個月。
包被板開封后請于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限為2個月。
【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標儀,37℃恒溫設(shè)備,可調(diào)微量移液器。
【樣品準備】
1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2~8℃保存,長期需置-20℃保存。
2. 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水.
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標板條,設(shè)空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
3.陰性、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照50μl;樣品孔每孔加入待測樣本50μL,空白孔不加。
4.除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,靜置,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.甩去孔內(nèi)液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6.每孔依次加底物液A、底物液B各50μL,蓋好蓋板膜,置37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),于450nm波長處測定各孔吸光值(A值),無參比波長用空白孔調(diào)零(即所有孔吸光值減去空白孔吸光值)。
【參考值】 實驗正常的情況下,陰性對照≤0.2,陽性對照≥0.8。
【檢驗結(jié)果的解釋】
1.C.O(臨界值)=0.25+陰性對照孔均值。
2.陽性判斷(Cut-Off值):陰性對照OD值+0.25,樣本OD值大于閾值,判定為陽性,反之,為陰性。。
【試驗方法的局限性】
該試驗僅作為定性檢測雞血清或血漿中禽呼腸孤病毒抗體,根據(jù)A值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。
【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣,嚴格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,各種實驗廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性,應(yīng)避免接觸皮膚和衣物,如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍的底物液不能使用。
4.酶標板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋,以防水滴凝聚在冷板條上。未用完酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
5.洗板不正確可以導(dǎo)致不準確的結(jié)果,在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
6.洗滌時各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈,消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
7.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。
8.試驗結(jié)果的判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
9.不同批號試劑組分不得混用。
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