Amplite 熒光法β-羥基丁酸酮體檢測試劑盒是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測羥基丁酸的試劑盒，當(dāng)血糖水平下降時(shí)，酮體由肝臟產(chǎn)生并在外周用作能量來源。兩個(gè)主要的酮體是 β-羥基丁酸酯 (Beta-HB) 和乙酰乙酸酯，而丙酮是第三豐富的酮體。正常情況下，這兩種主要的酮體在禁食和長時(shí)間運(yùn)動(dòng)時(shí)少量存在于血液中。在患有糖尿病、酒精或水楊酸中毒、缺乏、兒童低血糖等急性疾病狀態(tài)的患者中，血液中會(huì)發(fā)現(xiàn)大量的酮體。血液中酮體的過度產(chǎn)生和積累（酮癥）可導(dǎo)致病理性代謝性酸中毒（酮癥酸中毒）。酮癥酸中毒可能是致命的。量化 Beta-HB 的血酮測試方法，血液中的主要酮體（約 75%）已被用于診斷和監(jiān)測酮癥酸中毒的。 Amplite 熒光法β-羥基丁酸（酮體）檢測試劑盒提供靈敏的熒光分析，用于測量生物樣品中的 Beta-HB 水平。該測定基于 Beta-HB 的酶偶聯(lián)反應(yīng)，其中產(chǎn)物 NADH 可以通過熒光 NADH 傳感器進(jìn)行特異性監(jiān)測。熒光信號(hào)可以通過熒光酶標(biāo)儀測量。使用此熒光β-羥基丁酸檢測試劑盒，我們能夠在 100 µL 反應(yīng)體積中檢測低至 1.4 µM 的 Beta-HB。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Amplite 熒光法β-羥基丁酸酮體檢測試劑盒。

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡要概述

1.準(zhǔn)備β-HB工作溶液（50 µL）
2.添加β-HB標(biāo)準(zhǔn)品或測試樣品（50 µL）
3.在室溫下孵育10-30分鐘
4.監(jiān)測Ex / Em = 540/590 nm時(shí)的熒光增加

溶液制備

所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。 避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1. NAD儲(chǔ)備溶液（100X）：
將100 µL H2O加入NAD小瓶（組分C）中，制成100X NAD儲(chǔ)備溶液。

2.β-HB標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 mM）：
將1 mL H2O或1X PBS緩沖液添加到小瓶β-HB標(biāo)準(zhǔn)溶液（組分D）中，制成100 mMβ-HB標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.標(biāo)準(zhǔn)溶液

β-HB標(biāo)準(zhǔn)
向990 µL 1X PBS緩沖液中加入10 µL 100 mMβ-HB標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，以生成1000 µMβ-HB標(biāo)準(zhǔn)溶液（HB7）。取1000 µMβ-HB標(biāo)準(zhǔn)溶液（HB7），并在PBS中進(jìn)行1：3系列稀釋，以得到系列稀釋的β-HB標(biāo)準(zhǔn)溶液（HB6-HB1）。 注意：稀釋的β-HB標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)使用。

3.工作溶液

3.1 將5 mL測定緩沖液（組分B）加入一瓶酶混合物（組分A）中。

3.2 將50 µL NAD儲(chǔ)備溶液添加到組分A + B的瓶子中，并充分混合以制成β-HB工作溶液（組分A + B + C）。 注意：此β-HB工作溶液不穩(wěn)定，請(qǐng)立即使用，并避免直接暴露在光線下