Amplite 熒光法甘油-3-磷酸檢測試劑盒是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測甘油的試劑盒，甘油3-磷酸（G3P）是糖酵解代謝途徑中的重要中間體。動物，和植物使用G3P產(chǎn)生ATP。 它用于再生腦和骨骼肌細(xì)胞中的NAD +。 G3P與肥胖等脂質(zhì)失衡疾病有關(guān)。 Amplite 甘油3磷酸鹽檢測試劑盒提供了量化G3P靈敏的方法之一。 該試劑盒使用Amplite Red底物來量化G3P濃度，其與G3P氧化酶介導(dǎo)的酶偶聯(lián)反應(yīng)中過氧化氫的產(chǎn)生成正比。 該試劑盒是與HTS應(yīng)用兼容的優(yōu)化“混合和讀取"格式。 如圖1所示，它在100μL溶液（0.41μM）內(nèi)檢測到低至41皮摩爾的G3P。該測定可以在沒有分離步驟的方便的96孔或384孔微量滴定板格式中進(jìn)行。 在Ex / Em =?540/590 nm處使用熒光酶標(biāo)儀可輕松讀取其信號。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Amplite 熒光法甘油-3-磷酸檢測試劑盒。

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡要概述

1.準(zhǔn)備G3P工作溶液（50 µL）
2.添加G3P標(biāo)準(zhǔn)品或測試樣品（50 µL）
3.室溫孵育10-30分鐘
4.在Ex / Em = 540/590 nm時(shí)讀取熒光強(qiáng)度

溶液配制

1.儲存溶液配制

所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。 避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1.1 Amplite Red底物儲備液（200X）：
將50 µL DMSO（組分E）添加到Amplite Red底物（組分A）的小瓶中，制成200X儲備液。 避免暴露在光線下。

1.2 3-磷酸甘油（G3P）標(biāo)準(zhǔn)溶液（10 mM）：
將250 µL ddH2O加到G3P標(biāo)準(zhǔn)品（組分D）的小瓶中，制成10 mM G3P標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

G3P標(biāo)準(zhǔn)
將10 µL的10 mM G3P標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液添加到990 µL 1X PBS緩沖液中，以生成100 µM的標(biāo)準(zhǔn)溶液（CS7）。 然后執(zhí)行1：3的系列稀釋，以得到系列稀釋的G3P標(biāo)準(zhǔn)品（CS6-CS1）。 注意：稀釋的G3P標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)使用。

3.工作溶液配制

3.1 將5 mL測定緩沖液（組分C）添加到瓶酶混合液（組分B）中，并充分混合。

3.2 將25 µL Amplite Red底物儲備液（200X）加入組分B和C的瓶子中，制成G3P工作溶液（組分A，B和C）。注意：請立即使用并遠(yuǎn)離光線。 注意：可以將組分B和組分C的未使用混合物分成單份使用，并保存在-20°C下。