樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡要概述

1. 用測試化合物制備細(xì)胞（100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板）

2. 加入等量的Apopxin Orange工作溶液

3. 在室溫下孵育1小時(shí)

4. 在Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）或使用Cy3濾光片的熒光顯微鏡下檢測熒光強(qiáng)度（底部讀取模式）

溶液配制

工作溶液配制

將10μL的100X Apopxin 橙色（組分A）添加到1 mL的測定緩沖液（組分B）中，并充分混合以制成Apopxin Orange工作溶液。 注意： 100μLApopxin Orange工作溶液足以用于一個(gè)孔。現(xiàn)用現(xiàn)配避免長時(shí)間放置。

操作步驟

1.通過向PBS或所需的緩沖液中加入10ul /孔（96孔板）或2.5 µL /孔（384孔板）的10X測試化合物儲備溶液來處理細(xì)胞。 對于空白孔（不含細(xì)胞的培養(yǎng)基），添加相同量的化合物緩沖液。

2.將細(xì)胞板在5％CO2、37°C的培養(yǎng)箱中孵育（對于*樹堿處理過的Jurkat細(xì)胞，需要4-6小時(shí)）以誘導(dǎo)凋亡。

3.在每個(gè)孔中添加100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Apopxin Orange工作溶液。

4.在避光條件下，于室溫下孵育細(xì)胞板至少1小時(shí)。

5.以800 rpm的速度離心細(xì)胞板（特別是非貼壁細(xì)胞）2分鐘（制動）。

6.使用熒光酶標(biāo)儀（Ext / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm））或使用帶有Cy3®濾光片的熒光顯微鏡對圖像進(jìn)行熒光強(qiáng)度檢測。