樣品實驗方案

簡要概述

1. 用5×105至1×106細胞/ mL的密度制備含測試化合物的細胞

2. 在0.5 mL細胞溶液中加入1 µL 500X Nuclear Violet

3. 在室溫下孵育30-60分鐘

4. 使用405nm紫色光激發(fā)流式細胞儀進行分析

實驗步驟

1.對于每個樣品，請在0.5 mL的溫暖培養(yǎng)基或自備緩沖液中以5×105至1×106細胞/ mL的密度制備細胞。注意：應(yīng)單獨評估每種細胞系，以確定誘導(dǎo)凋亡的細胞密度。

2.用測試化合物處理細胞，以誘導(dǎo)凋亡或其他細胞周期功能。

3.向含有生長培養(yǎng)基的細胞中加入1µL 500X Nuclear Violet （組分A），并在37°C，5％CO2的培養(yǎng)箱中孵育細胞30至60分鐘。注意：對于貼壁細胞，用0.5mM EDTA輕輕提起細胞以保持細胞完整，并在用Nuclear Violet 孵育之前用含血清的培養(yǎng)基洗滌一次。注意：適當(dāng)?shù)姆跤龝r間取決于所用的單個細胞類型和細胞濃度。優(yōu)化每個實驗的孵育時間。注意：DNA染色前無需固定細胞，因為Nuclear Violet 具有細胞滲透性。

4.可選：以1000 rpm離心細胞4分鐘，然后將細胞重懸于0.5 mL檢測緩沖液（組分B）或自備緩沖液中。

5.使用405 nm紫色激光（Ex / Em = 405/445 nm）通過流式細胞儀檢測熒光強度